2.2.5.5 Isolement des lymphocytes spléniques et
numération cellulaire
Les animaux ont été splénectomisé
après sacrifice par dislocation cervicale et leur rate a
été collectée dans des conditions d'asepsie (Bishayi B,
2006).
Chaque rate prélevé a été
débarrassé de la graisse, poiles, tissus et sangs
périphérique puis pesée et broyée dans une solution
saline de 0.6% et centrifugée à 3000tours/min pendant
5minutes.
1ml d'eau distillé a était ajouter aux culots
cellulaires afin de provoquer un choc hypnotique, vortexer 10 a 20 secondes,
puis ces culots sont repris dans la solution saline de 0.9% pour arrêter
l'action hypnotique de l'eau.
Une deuxième centrifugation a été
réalisée dans les mêmes conditions, puis 0.5ml d'eau
distillé et 500 ìL de bleu de Trypon ont été
additionné aux culots cellulaires (Bleu Trypon dye exclusion technique)
afin de procéder à la numération lymphocytaire et la
détermination du nombre de cellules non viables (colorées en
bleu) et les cellules viables (non colorées) sur des cellules de
Malassez. (Obj X 40, Malassez DEPTH, TIEFE). (Bishayi B, 2006).
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