2.1.2.4 Test de la catalase
La catalase est une enzyme qui permet à la bactérie
de dégrader l'H2O toxique par la réaction suivante :
2H2O2 2H2O + O2
Les staphylocoques (catalase positive) et les streptocoques
(catalase négative) peuvent être différenciés par ce
test. Les germes producteurs de catalase peuvent dissocier le péroxyde
d'hydrogène en oxygène et en eau (Hart et Shears,
1999).
Technique
- Déposer sur une lame une goutte d'H2O2.
- On prélève une colonie isolée à
partir de gélose avec une pipette pasteur et la mettre en contact avec
la goutte de H2O2 , le résultât positif se traduit par
la formation immédiate de bulles gazeuses.
2.1.2.5 Identification API
Apres avoir effectué la coloration de Gram, l'utilisation
de la galerie API nous permet une identification rapide et fiable en utilisant
des plaques API Staph (Biomereux)
Technique
Apres incubation, on ajoute une goutte de chacun des
réactifs suivants : Test VP : VP1 et VP2
Attendre 10 minutes. Une couleur rose franche ou violette indique
une réaction positive.
Une couleur rose pale ou rose claire obtenue après 10
minutes doit être considéré comme négative.
Test NIT 1 et NIT 2
2.1.2.6 Screening / Criblage
Un criblage est une technique du laboratoire visant à
rechercher la résistance d'une souche
bactérienne vis-à-vis d'un ou de
plusieurs antibiotiques supposés ou connus.
Le principe consiste à placer la culture des
bactéries en présence du ou des antibiotiques et à
observer les conséquences sur le développement et la survie de
celle-ci. On peut par exemple placer plusieurs pastilles imbibées
d'antibiotiques sur une souche bactérienne déposée dans
une boîte de Pétri. Il existe trois
types d'interprétation selon le diamètre du cercle qui entoure le
disque d'antibiotique : souche ou bactérie sensible,
intermédiaire ou résistante.
5 pDliWDtiRQ 1d'pQ 1screening
Il a eté realisé selon les normes du Clinical and
Laboratory Standards Institute (CLSI ;2008). Technique
- Repiquer une colonie pure à partir d'une culture
developpée (Chapman) de 24 heures sur milieu solide dans 5 ml du
bouillon cur-cervelle.
- Incuber à 37°c pendant 6 à 7 heures sous
agitation.
- A l'aide d'un colorimètre,on mesure la densité
optique de l'inoculum et on l'ajuste en ajoutant la culture s'il est tres
faible ou l'eau physiologique s'il est tres fort. La densité
optique doit être entre 0.08 et 0.1 à 625nm
équivalente à une culture de 18h (CLSI, 2008).
- Apres 15 minutes et suivant à l'ajustement de la
turbidité de l'inoculum , on trempe un écouvillon dans cette
suspenssion.
- On presse fermement contre la paroi interieure du tube juste au
dessus du niveau du liquide , on fait tourner l'écouvillon pour enlever
les liquides excédentaires.
- On ensemence la surface de la gélose de Muller Hinton
par la technique d'épuisement en tournant la boite environ 60°
apres chaque application pour obtenir une distribution égale de
l'innoculum.
- On écouvillone par tout autour du bord de la surface de
la gélose.
- Puis 0.6g d'antibiotique d'oxacilline (Ox) dilluée dans
100 ml d'eau , 2 ml de cette solution
a été vérsée sur les boites de
pétri en jetant l'excés dès que possible à moins de
15 minutes aprés l'ensemensement à l'aide d'une pince
stérile.
- Enfin , on incube les boites à 35°c pendant 16
à 18h.
A : Racler une colonie B : Ensemencer dans BHIB
C : incubation sous agitation D : calibrer l'appareil par un tube
blanc
E : Mesure de la densité optique
Figure 2.1 Les étapes du
Screening
Le résultat s'est traduit par une croissance de
plusieurs colonies de staphylococcus aureus qui indique la
résistance à l'oxacilline d'où le nom Staphylococcus
aureus résistant à la méthiciline (SARM).
| 
