Chapitre 3 : Présentation et discussion des
résultats.
3.1. Présentation et interprétation des
résultats.
Le tableau qui suit va nous montrer comment les semences de
champignons Pleurotus
osteatus (P969) se sont comportées pendant la
reprise dans la culture in vitro tissulaire et sporée en fonction
d'antibiotiques.
Tableau 2 : Taux de reprise des semences
primaires.
|
Types de
culture
|
Antibiotiques
|
Taux de
reprise(en %)
|
Jour de
reprise(en jour)
|
Degré
d'infection
|
|
Tissulaire
|
Sans
|
40
|
1.5
|
**
|
|
Chloramphénicol
|
100
|
2.8
|
*
|
|
Gentamicine
|
100
|
2
|
*
|
|
Bénomyl
|
20
|
1
|
**
|
|
Sporée
|
Sans
|
20
|
2
|
***
|
|
Chloramphénicol
|
60
|
6
|
*
|
|
Gentamicine
|
80
|
6.7
|
*
|
|
Bénomyl
|
60
|
5.3
|
**
|
Avec, *: moins sévère, **:
sévère, ***: très sévère.
Du tableau 2, la culture tissulaire présente des
meilleurs taux de reprise que la culture sporée. La culture tissulaire
plus les antibiotiques (chloramphénicol et gentamicine) donne le
meilleur taux de reprise (100%).La culture tissulaire sans antibiotique a un
taux de reprise de 40% alors que le faible taux de reprise (20%) est
enregistré pour la culture tissulaire en combinaison avec le
bénomyl (un fongicide).
Pour la culture sporée, le taux de reprise
élevé est enregistré à la gentamicine (80%) alors
que le chloramphénicol et le bénomyl ne sont pas
différents (60%) et enfin, la culture sporée sans antibiotique a
donné le taux de reprise le plus faible (20%).
En culture sporée, la reprise la rapide est
trouvée chez la culture sans antibiotique avec un temps moyen de 1,2
jour et la moins rapide est chez la gentamicine avec un temps de 5,4
--' 26 --'
Pour la précocité de reprise, la culture
tissulaire est plus précoce que celle sporée. Les
premières reprises chez la culture tissulaire interviennent un jour
après ensemencement (chez bénomyl) et les plus tardives
interviennent à 2,8 jours (chez chloramphénicol). La culture
sporée est moins précoce, le traitement le plus précoce
intervient 2 jours après ensemencement (chez la culture sporée
sans antibiotique) alors que le plus tardif intervient 6,7 jours après
ensemencement.
La synthèse des données sur le jour de reprise est
reprise sur la figure 2 ci-dessus.
7
bénomyl chloramphenicol gentamicine sans
Effets d'antibiotiques selon la culture.
6
5
4,2
Jour de reprise.
4
3,2
2,6
3
2
1,2
1
0,4
0,4
0
5,4
2
spore Tissulaire
Figure 3 : Analyse de la vitesse de reprise sur
les différents types des cultures et d'antibiotiques.
Le graphique ci-après montre comment les semences ont
repris dans différents types de cultures (tissulaire et sporée)
en fonction d'antibiotiques utilisés. Ainsi dit ; nous trouvons que dans
les deux types de cultures, la reprise est lente là où les
antibiotiques sont utilisés que là où ils ne sont pas
utilisés, sauf chez le bénomyl dans la culture tissulaire et chez
la culture tissulaire sans antibiotique où la reprise est la même
et cette reprise est de 0,4 jour.
En culture tissulaire, la reprise la plus rapide se situe chez
la culture sans antibiotique et chez le bénomyl avec une durée de
reprise de 0,4 jour et la plus lente reprise se situe chez le
chloramphénicol avec une durée moyenne de 2,6 jours.
--' 27 --'
jours. Pour les deux types de cultures, il ya un effet
inhibiteur de ces antibiotiques sur la reprise des semences.
Les données relatives aux effets d'antibiotiques et de
types de culture sur le diamètre mycélien sont
représentées à la figure 3.
46,92
80
70
63,3
Effets d'antibiotiques par culture.
60
50
Diametre(mm)
40
30,02
30
17,2
20
40,3
23,04
3,7
10
0
spore Tissulaire
33,4
Figure 4 : Effets du type de culture et
d'antibiotiques sur Diamètre total mycélien.
Le graphique explique la variation du diamètre total
des mycéliums en fonction d'antibiotiques et de types de cultures.
En effet ; la culture tissulaire présente des meilleurs
résultats tant pour les antibiotiques que pour la culture sans
antibiotique. Le diamètre est plus élevé chez le
chloramphénicol (63,3mm). Le bénomyl sur la culture sporée
a donné de bons résultats (30,02mm de diamètre) que la
culture tissulaire. Le plus petit diamètre chez la culture tissulaire se
situe chez le bénomyl avec 17,2mm.
En culture sporée ; comme chez la culture tissulaire,
le diamètre le plus élevé se situe chez le
chloramphénicol avec un diamètre de 46,92mm et le plus petit se
trouve chez la culture sans antibiotique avec 3,7mm.
-' 28 -'
Les données relatives aux effets d'antibiotiques et de
types de culture sur la vitesse de croissance mycélienne sont
représentées à la figure 4.
8
7
6
6,33
4,692
Vitesse (mm)
5
4,03
4
3,34
3,002
3
2,304
1,72
spore Tissulaire
2
1
0,37
0
Effets d'antibiotiques par culture.
Figure 5 : Effets du type de culture et
d'antibiotiques sur la Vitesse de croissance
mycélienne.
Dans le graphique ci-haut, la vitesse de croissance
mycélienne varie selon les types de culture (tissulaire ou
sporée) et d'antibiotiques. Mais la culture tissulaire présente
encore une fois de plus des meilleurs résultats tant pour les types de
cultures que pour les antibiotiques.
En culture tissulaire, l'antibiotique présentant une
vitesse de croissance mycélienne plus rapide est le
chloramphénicol avec une moyenne de 6,33mm par jour et la vitesse la
plus petite se situe chez le bénomyl avec 1,72mm/jour en moyenne.
En culture sporée, la croissance mycélienne la
plus rapide est chez le chloramphénicol comme chez la culture tissulaire
avec une vitesse moyenne de 4,692mm/jour et la plus petite est chez la culture
sporée sans antibiotique avec une vitesse de 0,37mm/jour.
Les données relatives aux effets d'antibiotiques et de
types de culture sur le taux d'infections sont représentées
à la figure 5.
--' 29 --'
3,5
3
2
1,6
1,6
1,4
1 1
0,8 0,8
spore Tissulaire
2,5
2
1,5
1
niveau infection
0,5
0
Effets d'antibiotiques par culture.
Figure 6 : Effets du type des cultures et
d'antibiotiques sur le niveau d'infection.
Dans le graphique ci-après le niveau d'infection en
fonction de culture et d'antibiotiques est exprimé en échelle ;
et cette dernière va de 0 jusqu'à plus de 2.
De 0 à 1 : moins sévère. De 1 à 2 :
sévère.
Supérieur à 2 : très
sévère.
Pour les deux cultures ; il ya présence d'infection
mais la culture sporée présente plus d'infections que la culture
tissulaire. En culture tissulaire, les infections sont moins
sévères chez le chloramphénicol et la gentamicine et sont
sévères chez le bénomyl et chez la culture sans
antibiotique. En culture sporée, les infections sont moins
sévères chez le chloramphénicol et la gentamicine ; elles
sont sévères chez le bénomyl et sont très
sévères chez la culture sans antibiotique.
La corrélation entre le niveau d'infection et le
diamètre total du mycélium est donnée à la figure
6.
-' 30 -'
0,5
0
0 20 40 60 80 100
N.infe
Linéaire (N.infe)
y = -0,0063x + 1,4779 R2 = 0,0671
2,5
2
1,5
1
Figure 7 : Corrélation entre le niveau
d'infection et le diamètre total du mycélium.
Le graphique montre la corrélation qui existe entre le
niveau d'infection et le diamètre total du mycélium. Cette
droite, appelé droite des moindres carrés ou droite de
régression, nous montre qu'il existe une corrélation
négative entre le niveau d'infection et le diamètre total de
mycélium et cette corrélation est expliquée à 6,7%.
Ceci explique que lorsque le niveau d'infection augmente, le diamètre
total du mycélium diminue. Le R2 veut dire le coefficient de
détermination qui sert à expliquer la quantité
d'information fournie par la droite de régression.
Le tableau ci-après ; présente les
différents pathogènes après coloration Gram.
Tableau 3 : coloration de Gram.
|
TYPE DE CULTURE
|
Pathogènes
|
|
Bactérie Gram+
|
Bactérie Gram-
|
Cocci positif
|
Levures
|
Filament mycélien
|
|
Tissulaire
|
+
|
+
|
-
|
+
|
-
|
|
Sporée
|
+
|
+
|
-
|
+
|
+
|
+ : indique la présence, - : absence.
--' 31 --'
Les résultats du tableau 4, montrent les
différents pathogènes après la détermination de la
coloration Gram ; qui se sont développés dans les
différentes boites infectées de différents types de
cultures. La culture sporée a présenté un grand nombre des
pathogènes, sur lequel s'est développé les
Bactéries Gram-, les Bactéries Gram+, les levures, Levures, et le
filament mycélien. La culture tissulaire a présenté moins
de pathogènes avec la présence de bacteries Gram+ et - et des
levures.
b) Identification du genre des
pathogènes.
Le tableau qui vient après, présente le genre
des Bactéries gram- et les Cocci trouvés sur les
différents milieux.
Tableau 4 : Identification du genre.
|
Type des cultures
|
Bactéries Gram- Cocci
|
|
|
Tissulaire E. coli Staphycoques
Sporée Entérobacter
Entérocoques
Chez la culture tissulaire, le genre identifié est
Escherichia coli avec des cocci staphycoques tandis que la culture
sporée présente des Entérobacters avec des cocci
entérocoques.
Le tableau suivant, va montrer la façon dont il ya eu
croissance mycélienne des semences secondaires en fonction
d'antibiotiques et de substrat utilisé.
Le tableau 5 suivant, va montrer la façon dont il ya eu
croissance mycélienne des semences secondaires en fonction
d'antibiotiques et de substrat utilisé en semence.
--' 32 --'
Tableau 5 : Longueurs des mycéliums, des substrats
et présence d'infection pour les semences secondaires.
|
Type
culture
|
de
|
Antibiotiques
|
Diamètre mycélium (mm)
|
Longueur substrat
|
Infections
|
|
|
|
|
(mm)
|
|
|
|
Sans
|
35.5
|
95
|
0
|
|
|
Chloramphénicol
|
53.25
|
95
|
0
|
|
Tissulaire
|
|
|
|
|
|
|
|
Gentamicine
|
58
|
95
|
0
|
|
|
Bénomyl
|
89.75
|
95
|
0
|
|
|
Sans
|
0
|
95
|
0
|
|
Sporée
|
|
Chloramphénicol
|
45.5
|
95
|
1
|
|
|
Gentamicine
|
45.75
|
95
|
0
|
|
|
Bénomyl
|
81.75
|
95
|
0
|
Pour la culture tissulaire, le meilleur résultat se
trouve (la longueur la plus admirable du mycélium est de 89,75mm) chez
le bénomyl et le résultat le moins favorable (la plus petite
longueur mycélienne est de 35,5mm) chez la culture tissulaire sans
antibiotique.
Pour la culture sporée, le mycélium s'est bien
développé aussi chez le bénomyl et la longueur du
mycélium est de 81,75mm et ce dernier s'est mal développé
chez la culture sporée sans antibiotique où la longueur
mycélienne est de 0mm c'est-à-dire qu'il n'y avait pas eu reprise
de la semence secondaire.
Pour les infections, ces derniers sont observables uniquement
chez la culture sporée, plus précisément chez la culture
sporée avec le chloramphénicol.
-' 33 -'
3.2. Discussion des résultats.
Eu égard aux différents résultats obtenus
lors de notre étude dont l'objectif était d'évaluer
l'effet de types de cultures tissulaire et sporée et d'antibiotiques sur
le contrôle d'infections en culture in vitro du champignon Pleurotus
ostreatus P969.
En effet ; selon certains auteurs, la culture sporée
pour les semences primaires présenterait des meilleurs résultats,
mais elle n'est pas souvent pratiquée à cause de sa
délicatesse et de la connaissance qu'il existe ou pas des spores
différemment à la culture tissulaire où on touche les
tissus à inoculer (Dibaluka et al., 2010) . Contrairement
à nos résultats, la culture tissulaire a présenté
des bons résultats tant pour les diamètres des mycéliums
que pour le niveau d'infections. Pour les diamètres mycéliens, la
culture tissulaire a pour tous les traitements les diamètres
supérieurs aux diamètres chez la culture sporée sauf chez
le bénomyl dans la culture sporée où le diamètre
mycélien est supérieur au diamètre mycélien chez le
bénomyl dans la culture tissulaire. Pour le niveau d'infections, la
culture sporée a présenté beaucoup d'infections que la
culture tissulaire, sauf chez le bénomyl dans la culture sporée
où le diamètre mycélien est le même. Les deux
résultats nous ont permis de dire que le milieu de culture PDA n'est pas
souvent contaminé par les champignons (utilisation du fongicide
bénomyl), ce sont souvent des bactéries qui attaquent ce
milieu.
L'effet d'antibiotiques particulièrement le
chloramphénicol et la gentamicine sur le contrôle d'infections en
culture in vitro ; selon certains auteurs (Anonyme, 2009), le
chloramphénicol est utilisé en milieu de culture pour inhiber la
croissance des bactéries (un bactériostatique) et favoriser celle
des champignons. La gentamicine quant à lui, tue les bactéries en
faveur des champignons en milieu de culture(bactéricide) ; ce qui a
confirmé nos résultats ; car les diamètres
mycéliens sont plus élevés chez le chloramphénicol
(diamètre total du mycélium est de 63,3mm pour la culture
tissulaire et de 46,92mm pour la culture sporée ) dans les deux types de
cultures (tissulaire et sporée) suivi de gentamicine dans la culture
tissulaire (40,3mm de diamètre), mais dans la culture sporée le
chloramphénicol est suivi du bénomyl (30,02mm de diamètre)
pour le diamètre mycélien.
Pour le niveau d'infections, les deux antibiotiques ont
présenté les moins d'infections dans les deux types de cultures
(tissulaire et sporée) que d'autres traitements dans notre dispositif
expérimental des semences primaires. Le niveau d'infections est tel que,
chez le chloramphénicol et la gentamicine est le même dans la
culture sporée (même niveau d'infections) et dans la culture
tissulaire, les deux antibiotiques présentent encore une fois le
-' 34 -'
même niveau d'infections, mais c'est dans la culture
sporée que le niveau d'infections est élevé que la culture
tissulaire.
Nos résultats montrent que ; plus les infections
augmentent dans les boites de pétri, les diamètres des
mycéliums diminue ; ce que la figure 6 explique qu'il existe une
corrélation négative entre le niveau d'infection et la croissance
mycélienne. Ce qui est vrai que lorsque les infections sont nombreuses
le développement mycélien doit nécessairement être
entravé.
Mais aussi, plus les mycéliums durent longtemps dans
les boites de pétrie, plus les infections augmentent.
Pour les semences secondaires, les meilleurs résultats
sont obtenus chez le bénomyl dans les deux types de cultures (tissulaire
et sporée). Le bénomyl étant un fongicide, tout champignon
qui peut se développer autre que le Pleurotus ostreatus doit
être tué (Anonyme, 2009), ceci expliquerait la croissance rapide
du mycélium tandis que le chloramphénicol a
présenté les infections ; la gentamicine n'a pas
présenté les infections, mais sa croissance mycélienne est
inferieure à celle de chloramphénicol.
-' 35 -'
| 
