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REPUBLIQUE DEMOCRATIQUE DU CONGO
ENSEIGNEMENT SUPERIEUR, UNIVERSITAIRE
ET
RECHERCHE SCIENTIFIQUE
UNIVERSITE EVANGELIQUE EN AFRIQUE
U.E.A.
B.P : 3323
FACULTE DES SCIENCES AGRONOMIQUES ET
ENVIRONNEMENT
Effets des types de cultures (tissulaire et
sporée) et d'antibiotiques
(chloramphénicol, gentamicine et bénomyl)
sur le contrôle d'infections en
culture in vitro du champignon comestible
(PleurotusostreatusP 969).
Travail de fin de cycle pour l'obtention du diplôme de
graduat :
Par : DIEUMERCI MASUMBUKO Roosevelt
Option : Agronomie générale
Encadreur : CT.MUKENGERE BAGULA Espoir Ass. MONDO MUBALAMA
Jean
Année académique :
2014-2015.
~ I ~
Prélude.
«Aux âmes bien-nées, la valeur n'attend point
le nombre d'années » dit-on.
Pierre Corneille.
~ II ~
Dédicace.
A ma mère Régina M'NTALINDWA.
A mon cher oncle BAGULA NTALINDWA et sa femme CHIREZI
BUDUNDWA.
A mon grand et petit frère IMANI MASUMBUKO et MURHABAZI
MASUMBUKO.
A mes chers cousins et cousines Espoir BAGULA, Esperance BAGULA,
Olivier BAGULA, Willy BAGULA, Patience BAGULA, NYOTA BAGULA, Timothée
BAGULA, Joël BAGULA, Christelle BAGULA, et MUKENGE NAMUBAMBA.
Aux familles NTALINDWA et LUMESHA.
A tous mes cousins, cousines, oncles et tantes. A tous mes amis
et connaissances.
A celle qui portera la charge du coeur de ce grand homme que
l'UEA vient de former pendant trois ans.
Roosevelt MASUMBUKO.
~ III ~
Sigles et abréviations.
UEA : Université Evangélique en Afrique.
PDA : Pomme de terre Dextrose Agar.
CO2 : Dioxyde de carbone.
O2 : Oxygène.
Tcm optimale : l'intervalle des températures optimales
pour la fructification.
KV : Kanamycine - Vancomycine, dite "Kana-Vanco". MCK :
MacConkey(une gélose).
SM2 : Milieu sélectif des bactéries à Gram
négatif.
CAN2 : Candida Albicans: Acide
désoxyribonucléique.
ARN : Acide ribonucléique. pH : Potentiel en
hydrogène.
~ IV ~
Remerciements.
C'est par cet adage de Pierre Corneille, « Aux
âmes bien-nées la valeur n'attend point le nombre d'années
» que nous avions débuté ces quelques mots de
remerciement pour toutes les personnes qui ont contribué à
l'achèvement de ce travail.
Nos remerciements les plus sincères s'adressent au chef
des travaux MUKENGERE BAGULA Espoir et à l'assistant MONDO MUBALAMA Jean
qui ont accepté de diriger ce travail jusqu'à sa fin.
Notre profonde gratitude est exprimée à l'UEA,
particulièrement la Faculté des sciences agronomiques et
environnement qui, par le doyen KATCHO KARUME via le CEREA, nous a donné
l'opportunité d'effectuer notre travail dans son projet «
Champignon ».
A mon très cher oncle BAGULA NTALINDWA et sa femme
CHIREZI BUDUNDWA, nous leur disons grand merci pour tous ce qu'ils ont fait
pour nous, en nous offrant de bonnes conditions d'étude malgré le
manque des moyens financiers.
Nos remerciements s'adressent aussi à ma très
chère maman Régina M'NTALINDWA qui a supporté toutes nos
caprices durant le moment passé ensemble.
Nous ne pouvons pas oublier de remercier les membres du corps
scientifique et cadres de la Faculté des sciences agronomiques et
environnement de l'UEA, pour l'effort consenti à nous assurer une
formation de qualité. Les connaissances acquises auprès d'eux
nous ont permis d'élaborer ce travail, particulièrement au Maitre
en sciences Gaston AMZATI et le Maitre en sciences AYAGIRWE BASENGERE.
Nos remerciements les plus sincères s'adressent
également à mes amis Arsène MUKOME, Charles BAGABO, AMZATI
SAIDI, MAJALIWA MAITAPO et AGANZE MWEZE pour les conseils prodigués.
Nous tenons enfin, à remercier nos collègues et
camarades de promotion pour leur soutien pendant des bons et mauvais moments
passés ensemble.
A tous ceux qui ont contribué tant
matériellement que moralement, de près ou de loin pour la
réussite de ce travail, nous leur remercions infiniment.
Roosevelt MASUMBUKO.
~ V ~
Listes des tableaux et figures.
Tableau 1 : Quelques familles d'antibiotiques.
Tableau 2 : Taux de reprise des semences primaires.
Tableau 3 : Coloration de Gram. Tableau 4 : Identification du
genre.
Tableau 5 : Longueurs des mycéliums et des substrats et
présence d'infection pour les semences secondaires.
Figure 1 : A droite : Penicillium (bleu) et Cladosporium (vert
foncé). A gauche : Aspergillus : inhalation de spores dangereuse.
Figure 2 : Dispositif expérimental pour les semences
primaires.
Figure 3 : Analyse de la vitesse de reprise sur les
différents types de cultures.
Figure 4 : Effets du type de culture et d'antibiotiques sur le
diamètre total du mycélium.
Figure 5 : Effets de types de cultures et d'antibiotiques sur la
vitesse de croissance mycélienne.
Figure 6 : Effets du type des cultures et d'antibiotiques sur le
niveau d'infection. Figure 7 : Corrélation entre le niveau d'infection
et le diamètre total du mycélium.
~ 1 ~
Introduction
Contexte, problématique et justification du
sujet.
Notre province possède une faune et une flore sauvages
très riches et encore insuffisamment mises en valeur. C'est entre autre
le cas des champignons comestibles qui ; s'ils sont objet de cueillette
saisonnière n'ont pas encore été mis en culture (Musibono
et al., 1992).
Les champignons comestibles sont des aliments très
nutritifs ; ils contiennent des quantités importantes des sels
(minéraux, glucides et vitamines) et sont une source importante des
protéines (Hexiang et al., 2002).Tout en permettant de varier
l'alimentation, les champignons procurent un complément riche en
minéraux, en vitamines et même en protéines, rivalisant
ainsi avec les meilleurs légumes (Bart, 1994). Ils constituent des
produits forestiers non ligneux d'une importance capitale et sont très
recherchés pour leur valeur nutritive élevée, leur valeur
marchande ainsi que pour les nombreux sels minéraux et vitamines qu'ils
contiennent (Breene, 1990 ; Vetter, 1994 ; Mattila et al., 2001 ;
Ndoye et al., 2007; Ndong, 2009). Les champignons, étant
également pourvus de vertus médicinaux, sont
considérés comme idéals pour les hypertendues, les effets
rénaux et les diabétiques (Yip et al., 1987; Chandy,
1997) et sont souvent considérés comme aliments
thérapeutiques ayant des propriétés
anticholesterolémiques (Bobek et al., 1995, Galbavy et al.,
1999, Mattila et al., 2000).
Cependant, la nourriture obtenue grâce à la
cueillette et qui accompagne les produits de base est saisonnière (De
Merode et al., 2004). La saisonnalité dans l'apparition des
sporophores reste ainsi un facteur limitant pour leur disponibilité,
souvent aléatoire et concentrée sur quelques semaines par an,
principalement en saison des pluies (Dibaluku et al., 2010).
Dès lors, la mise en culture des champignons se révèle
être une activité rentable pour les paysans congolais.
Pour réaliser la culture de ces champignons ; il
conviendrait de sélectionner les espèces qui se prêtent
bien à la culture mycélienne à partir des spores ou des
tissus sporifères. Cette recherche devrait permettre de réduire
la dépendance des consommateurs kivutiens par rapport à la
cueillette saisonnière qui est insuffisante (Cohen et al.,
2002).
Bien que la culture des champignons soit une
réalité prouvée ; dans des nombreux pays en voie de
développement, la disponibilité du blanc (semences) de bonne
qualité représente un facteur de limitation de la culture des
champignons. L'importation est souvent entravée par la
--' 2 --'
bureaucratie des services des douanes, les couts de transport
élevés et la difficulté de garder le blanc à une
température basse pendant le transport (Oei, 2005).
La difficulté de produire le blanc (semences des
champignons) de manière synthétique est liée à des
problèmes d'infections dues aux bactéries ou d'autres champignons
en concurrence avec le champignon en culture. Ces bactéries ou autres
champignons peuvent avoir une croissance rapide que le champignon en culture et
occuper tout le milieu gélosé, d'où l'échec de la
culture (Khaled et al., 2007). La température excessive et
très basse du milieu de culture peut influencer les infections dans les
milieux de culture en favorisant la croissance des pathogènes et
l'inhibition de la croissance des champignons en culture (Blaizot, 2011).
La lutte contre les infections dans la culture in vitro des
champignons comestibles demeure donc une préoccupation première
des recherches sur les champignons. Ces infections peuvent être à
l'origine d'une faible production du blanc (semences des champignons) ou
presqu'inexistant lorsque les pathogènes prédominent dans les
milieux de culture et que lorsqu'il y a d'autres champignons non
cultivés qui s'y développent.
Le présent travail a tenté de faire la
combinaison de différentes combinaisons d'antibiotiques et types de
culture afin d'identifier laquelle assure le mieux le contrôle
d'infections en culture in vitro.
Questions de recherche.
Pour notre travail, nous avions conçu les questions
suivantes qui nous ont aidés à la réalisation de cette
recherche :
? Quels seraient les effets de différents antibiotiques
sur le contrôle d'infection en culture in vitro de Pleurotus
ostreatus ?
? Quels seraient les effets de différents types de
culture sur le contrôle d'infection en culture in vitro ?
? Quels seraient les différents pathogènes
susceptibles d'attaquer le milieu de culture pour les différents types
de culture utilisés
? Quels seraient les effets de ces différents facteurs
(types de culture et antibiotiques) combinés sur la vitesse de
croissance et le développement mycélien ?
~ 3 ~
Hypothèses.
Nous nous sommes fixés les hypothèses
ci-après :
· Les différents antibiotiques permettraient le
contrôle efficace des pathogènes sur milieu de culture.
· Les types de cultures auraient une influence non
négligeable dans le contrôle d'infections en culture in vitro. La
culture sporée produirait mieux que la culture tissulaire sur PDA.
· Le nombre et genres de pathogènes varieraient
d'un type de culture à l'autre en production in vitro du champignon.
· Les effets combinés des types de culture
à des antibiotiques amélioraient la vitesse de croissance et le
développement mycélien.
Objectifs.
Objectif global.
Contribuer au contrôle d'infections dues aux
pathogènes en culture in vitro de champignon comestible (Pleurotus
ostreatus).
Objectifs spécifiques.
· Evaluer l'efficacité de différents
antibiotiques dans la lutte contre les infections en culture in vitro de
Pleurotus ostreatus ;
· Evaluer l'efficacité de différents types
cultures (tissulaire ou sporée) sur le contrôle d'infections en
culture in vitro de Pleurotus ostreatus ;
· Identifier les différents pathogènes
(bactéries et champignons compétiteurs) pouvant s'attaquer aux
différents types de culture utilisés ;
· Evaluer les effets combinés des types de
culture et d'antibiotiques sur la vitesse de croissance et le
développement mycélien.
> Hyphe : filament microscopique formé des cellules
tubulaires qui constituent la partie végétative (mycélium
ou thalle) ou reproductrice (sporophore) d'un champignon.
~ 4 ~
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