- Recherche des virus dans les
échantillons de selles prélevés
Tous les prélèvements étaient
destinés à la recherche des rotavirus. Le test utilisé
était celui le « Vikia
Rota-AdénobioMérieux » qui permet de rechercher
respectivement les rotavirus et Adénovirus dans les échantillons
de selles par l'intermédiaire d'une technique immunochromatographique
sur membrane. Ce sont des tests spécifiques qui présentent une
rapidité et une facilité d'exécution excellentes.
· Principe
Vikia Rota-Adeno est un test qualitatif basé sur
l'association d'anticorps monoclonaux spécifiques respectivement de
rotavirus et d'adénovirus. Ce test repose sur un système de
réactions immunologiques réalisées sur une bandelette par
migration (format ICT ou lateral flow) [notice du test].
Le test est composé :
Ø d'une cassette plastique contenant
:
o Une membrane de chromatographie sur laquelle sont
fixés :
§ dans la zone de test, un anticorps monoclonal
anti-rotavirus (zone «R ») et un anticorps monoclonal
anti-adénovirus (zone « A »)
§ dans la zone de contrôle, un anticorps
polyclonalanti-IgG de souris (zone « C »)
o Un support imprégné d'un conjugué
constitué du mélange d'un anticorps monoclonal anti-rotavirus
couplé à des microsphères de polystyrène de couleur
bleue et d'un anticorps monoclonal anti-adénovirus couplé
à des microsphères de polystyrène de couleur rouge.
Ø Un flacon de tampon de dilution des selles :
Tampon phosphaté (pH 7,2) + azoture de sodium 0,9 g/l
prêt à l'emploi.
L'échantillon émulsionné dans le tampon
de dilution du test est introduit au niveau du puits échantillon et
migre par capillarité le long de la membrane.
· Si l'échantillon contient des rotavirus, ceux-ci
forment un complexe antigène-anticorps avec les anticorps
spécifiques de ce virus présents sur les microsphères de
polystyrène de couleur bleue.
· Si l'échantillon contient des adénovirus,
ceux-ci forment un complexe antigène-anticorps avec les anticorps
spécifiques de ce virus présents sur les microsphères de
polystyrène de couleur rouge.
Les complexes antigène-anticorps migrent le long de la
membrane et se fixent aux anticorps anti-rotavirus et/ou aux anticorps
anti-adénovirus, formant des complexes visualisés par une ligne
bleue et/ou rouge dans la zone de test respectivement « R » et/ou
« A » de la membrane.
L'absence de cette/ces ligne(s) suggère un
résultat négatif.
A titre de contrôle, une ligne de couleur
apparaîtra toujours dans la zone de contrôle
« C » si le test a été effectué
correctement.
· Préparation des
échantillons
Ø Dévisser le bouchon du flacon de dilution et
extraire la tige nécessaire au prélèvement de la selle.
Ø Prélever une quantité d'environ 50 mg
de selle (soit l'équivalent d'un quart de petit pois) à l'aide de
la tige du flacon.
Ø Introduire cet échantillon dans le flacon
contenant le tampon de dilution.
Ø En cas de selle liquide, prélever la selle
à l'aide de la pipette et distribuer 2 gouttes de cet échantillon
(environ 50 micro litres) dans le flacon contenant le tampon de dilution.
Ø Revisser le bouchon du flacon de dilution.
Ø Agiter vigoureusement jusqu'à
homogénéisation.
· Mode opératoire
Ø Retirer la cassette du sachet scellé et
l'utiliser rapidement
Ø Placer la cassette sur une surface plane et propre
Ø Casser l'embout du flacon contenant
l'échantillon dilué
Ø Renverser le flacon et tenir verticalement.
Ø Transférer 2 gouttes d'échantillon
dilué (environ 80 micro litres) dans le puits échantillon de la
cassette et déclencher le chronomètre.
Ø Eviter la formation de bulles d'air dans le puits.
Ø Attendre l'apparition de la ligne de contrôle
« C » et éventuellement des lignes « R » et/ou
« A ».
Ø Lire le test 10 à 15 minutes après
avoir déposé l'échantillon.
a b 
Figure 12: Photos des échantillons de selles et
kits pour le test de rotavirus et adénovirus
La photo `'a'' montre les échantillons de selles
d'enfants et 2 kits de vikia rota-adenovirus prêts à l'emploi ;
La photo `'b'' indique le transfert de 2 gouttes de
l'échantillon dilué dans le puits de la cassette.
· Interprétation des
résultats
Ø Résultats positifs : deux ou
trois lignes distinctes apparaissent : une dans la zone de contrôle (C),
et/ou deux dans la zone de test, bleue en R et/ou rouge en A.
o Si présence d'une ligne bleue en R :
l'échantillon est positif en rotavirus (photo a).
o Si présence d'une ligne rouge en A :
l'échantillon est positif en adénovirus (photo b)
o Si présence des deux lignes, bleue en R et rouge en A
: l'échantillon est positif en rotavirus et adénovirus. (photo
c)
Ø Négatifs : Une ligne
colorée apparaît dans la zone de contrôle (C). Aucune ligne
n'apparaît dans la zone de test R et A. (photo d)
Ø Non valide : la ligne de
contrôle n'apparaît pas.
a b 
c d 
Figure 13: Photos montrant les différents
résultats possibles avec le test après lecture.
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