8.2- Prélèvement du LCR
Principe : Le prélèvement du
LCR se faisait par la ponction lombaire qui était réalisée
entre le 3è et le 4è espace inter vertébrale lombaire. Le
LCR recueilli permettait de faire un examen cytobactériologique.
8.2.1- Mode opératoire
Examen cytobactériologique
L'examen d'un LCR est l'un des examens d'urgence du
laboratoire de bactériologie. L'examen macroscopique consiste à
examiner le tube de prélèvement le plus clair et le plus rempli.
Noter l'aspect macroscopique : Limpide, eau de roche, hémorragique,
xanthochromique, légèrement trouble à eau de riz,
purulent.
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METHODOLOGIE
Ensemencement
Nous avons respecté les conditions rigoureuses
d'asepsie (travail à proximité de la flamme), utilisés des
géloses préchauffées à 37°C et
ensemencées ; 1 gélose au sang, 1 gélose chocolat-Poly
Vite X, CHOC+VCN, CHAPMAN, EMB ou MAC Conkey, Sabouraud+CMP....). A l'aide
d'une pipette Pasteur stérile on a déposé 3 gouttes de LCR
à 3 endroits distincts sur chaque gélose pour faciliter
l'interprétation de la culture en cas de contamination, on a mis les 2
géloses à incuber à 37°C sous CO2 jusqu'au lendemain
matin.
Cytologie
On a homogénéisé le LCR par agitation
douce du tube, déposé 1 mm3 de LCR dans une cellule de
Malassez, laissé sédimenté 5 mn, compté les
éléments sur l'ensemble de la cellule à l'objectif 40X
à sec, établi ainsi le nombre d'hématies et de leucocytes
présents par mm3. En cas de doute pour différencier
les hématies des leucocytes, on peut ajouter une goutte d'acide
acétique 0,1N sur un bord de la cellule de Malassez provoquant ainsi la
lyse des hématies sans altération des leucocytes. Remplir par
capillarité la cellule de Malassez : compter dans 05 bandes et
multiplier par 02 pour trouver le nombre par mm3, centrifugé.
Avec le culot, confectionner lame de Gram ; lame pour formule leucocytaire
qu'on colorera au MGG afin d'apprécier le pourcentage des
polynucléaires par rapport aux mononucléaires.
Techniques à l'encre de chine
01 goutte de LCR (culot) + 02 gouttes d'encre de chine sur
lame + lamelle. Lire à 10X, diaphragme fermé. Apres 24H, nous
avons interprété les milieux de culture.
8.2.2- Résultats
Sera considérée comme méningite
bactérienne, tout LCR dont la macroscopie à un aspect trouble ou
purulent. La cytologie présente normalement 20 à 30
éléments/mm3 dont 50% de polynucléaires ; la
protéinorachie peut être supérieure à 1,5 g/l et la
glycorachie entre 2 et 3 mmol/l et une chlorurachie normale (42)
.
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METHODOLOGIE
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