Evaluation de la fonction hépatique des patients soumis au traitement par les tuberculostatiques

IV.2 Méthodes

IV.2.1 Choix des méthodes de dosage

L'activité des enzymes hépatiques a été déterminée par la méthode cinétique. Le choix porté sur cette méthode a été orienté par sa grande fiabilité. C'est, en effet, une méthode spécifique, très sensible, et pratique. Elle est reproductible et permet de visualiser l'activité enzymatique.

Nous avons suivi le mode opératoire indiqué par la maison CYPRESS fabriquant les kits des réactifs que nous avons exploités.

IV.2.2 Dosage de la Gamma-Glutamyl-Transférase (ã-GT) et des transaminases [GOT ou ASAT et GPT ou ALAT]

1. Principe de la méthode de dosage : Détermination cinétique d'activité de ã-GT, GOT (ASAT) et de GPT (ALAT) selon les réactions ci-dessous.

La lecture de l'absorbance initiale au photomètre et des absorbances toutes les minutes pendant trois minutes permet de calculer la différence entre les absorbances et les différences d'absorbances moyenne par minute de NADH dont la vitesse de consommation est déterminée photométriquement et est directement proportionnelle à l'activité de l'enzyme dans l'échantillon selon le cas (ã-GT ou du GOT ou du GPT).

- Pour ã-GT :

L-ã-glutamyl-3-carboxi-p-nitroanilide + glycylglycine ã-GT

L- ã-glutamylglycine - 5-amino-2-nitrobenzène

- Pour GOT :

á-cétoglutarate + Asparate GOT Glutamate + oxaloacétate

Oxaloacétique MDH Malate

NADH⁺ + H⁺ NAD

- Pour GPT

á-cétoglutarate + Alanine GPT Glutamate + pyruvate

Pyruvate LDH lactate

NADH⁺ + H⁺ NAD

2. Mode opératoire :

- Préparation des réactifs :

Ø Dissolvez une tablette R₂ (NADH 0,18mmol/litre) dans 15 ml du tampon R₁ (tampon tris 80 mmol/litre de pH = 7,8)

Ø Couvrir de capuchon et mélanger pour dissoudre le contenu.

Cette solution de travail est stable pendant 72 heures entre 15 - 25°C ou 21 jours entre 2-8°C.

- Réalisation du test :

Ø Prélever 1 ml de solution de travail ;

Ø Prélever 0,10 ml de l'échantillon ;

Ø Mélanger et attendre une minute ;

Ø Lire l'absorbance initiale à 340 nm ;

Ø démarrer le chrono et lire les absorbances toutes les minutes pendant trois minutes.

Ø Calculer la différence entre les absorbances et les différences d'absorbance moyenne par minute.

3. Valeurs de références^32(*) :

- Femme : < 32 UI/litre

- Homme : < 40 UI/litre

IV.2.3 Analyse statistique des résultats

Pour l'analyse de nos données, nous devons analyser l'effet de l'affection hépatique selon le sexe et l'âge aux fins d'en déterminer les personnes les plus affectées ainsi que la tranche d'âge plus affectée. D'où, faudra-t-il calculer la moyenne, la variance et même déterminer la classe modale.

Nous nous servirons de tests statistiques tels que la moyenne, la variance, la comparaison des moyennes et des variances des cas témoins et des sujets tuberculeux au début et à la fin du traitement ainsi que la comparaison des proportions des sujets dont les taux des transaminases sont élevés dans le premier dosage et le second. Ce qui permettrait de confirmer la présence ou l'absence d'affection hépatique (hépatite médicamenteuse) et de déterminer la phase la plus concernée (cytolyse ou cholestase).

De ce fait, nous nous servirons du test statistique d'écart-réduit afin d'en tirer la conclusion à partir des formules ci-dessous :

Comparaison des moyennes  ;

Comparaison des variances

et comparaison des proportions et/ou

* ³² Kaplan A et Al., 1984, Gendler S. -GT, Clin Chem the C.V. Mosby, Saint Louis, Torronto, Princeton, pp 1220-1223 (CYPRESS DIAGNOSTICS : www.doagnostic.be)