Chapitre IV :
MATERIEL ET METHODES
IV.1 Matériel
IV.1.1 Echantillonnage
Notre population d'étude était constituée
des sujets tuberculeux de l'Est de la ville de Kinshasa.
De cette population, nous avons sélectionné les
sujets qui ne présentaient pas de coïnfection et plus
particulièrement les malades souffrant de la tuberculose sans un terrain
de VIH et ceux n'ayant pas un antécédent hépatique.
Nous avons ainsi retenu dans notre étude 49 sujets,
pour cas témoins, et 50 sujets tuberculeux de deux sexes
répondant aux conditions suivantes :
- N'avoir pas reçu aucun traitement avant le
prélèvement ;
- Etre un nouveau cas de tuberculose pulmonaire
avéré par des examens de laboratoire ;
- Avoir accepté volontairement et verbalement de
participer à l'étude.
Pour identifier les cas de VIH, nous nous sommes servis des
Kits de "Détermine" de dépistage, tandis que les
antécédents hépatiques étaient
détectés à partir des fiches de consultation.
Tous les sujets retenus dans l'étude étaient
des malades reçus en consultation dans les centres de santé qui
prennent gratuitement en charge ce type des malades et qui sont situés
dans les communes de Masina, Limete et Barumbu.
IV.1.2 Cadre
et période d'étude
Nous avons travaillé sur des prélèvements
effectués en deux périodes : Dans un premier moment, au
début du traitement (juillet 2008) et au sixième mois,
c'est-à-dire à la fin du traitement (décembre 2008).
Les échantillons biologiques prélevés
étaient constitués du sang veineux à partir duquel nous
avons extrait le sérum. Celui-ci constituait le véritable
échantillon de travail dans lequel nous avons dosé les enzymes
hépatiques (ã-GT, GOT et GPT).
IV.1.3 Equipement et réactifs de laboratoire
Le sang prélevé au centre de santé
était acheminé au laboratoire de la Clinique de la Commission
Electorale Indépendante où nous avons effectués nos
analyses : extraire le sérum et procéder au dosage des
enzymes précitées. Trois heures de temps s'écoulaient
entre le prélèvement et le dosage.
Le sang était prélevé au pli du coude
dans un tube sec, puis centrifugé à 2000 tours/minute grâce
à la centrifugeuse de marque Labofuge.
Pour réaliser les analyses, nous nous sommes servis de
l'équipement et réactifs de laboratoire ci-après :
- Un spectrophotomètre UV série 1247, de marque
Visual/70VB0357 ;
- Des seringues à 5 cc à usage unique ;
- Tubes à essai ;
- Les Kits de dosage :
§ Kit SGOT : fabriqué par la maison CYPRESS,
série HBEO6, Lot Soc-64A, péremption : novembre 2009
§ Kit SGPT : fabriqué par la maison CYPRESS,
série HBE07, lot SPC-77, péremption : août 2010
§ Kit ã-GT : fabriqué par la maison
CYPRESS, série HBEO5, lot B-93, péremption : juin 2009.
- Composition des réactifs
§ Kit SGOT
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Composition
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Concentration
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Quantité
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Réactif 1
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Tampon TRIS pH 7,8
L- Asparate
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80 mmol/l
200 mmol/l
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1x235 ml
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Réactif 2
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NADH
LDH
MDH
á-cétoglutarate
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0,18 mmol/l
800 mmol/l
600 mmol/l
12 mmol/l
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15x1reagent
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§ Kit SGPT
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Composition
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Concentration
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Quantité
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Réactif 1
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TRIS Buffer pH 7,8
L- Alanine
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80 mmol/l
200 mmol/l
|
1x235 ml
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Réactif 2
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NADH
LDH
á-cétoglutarate
|
0,18 mmol/l
1200 mmol/l
15 mmol/l
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15x1reagent
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§ Kit ã-GT
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Composition
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Concentration
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Quantité
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Réactif 1
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Tampon Tris pH 8,6
L- Alanine
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100 mmol/l
200 mmol/l
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1x235 ml
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Réactif 2
Substrat
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Glycylglycine
L-ã-glutamyl-3-carboxy-4-nitroanilide
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100 mmol/l
3 mmol/l
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15x1reagent
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