Etude ethnobotanique, biologique et chimique des plantes réputées antipaludéennes à lubumbashi en RD Congo

III.3.2. DILUTION ET ENSEMENCEMENT DES EXTRAITS À TESTER

Le poids de départ de chaque échantillon était de 8mg à partir des quels nous avons préparé une solution mère (de 2mg/ml) de laquelle nous avons effectué une série des dilutions (huit au total). Ce qui permet d'obtenir successivement les concentrations suivantes : 1 mg /ml, 0.5mg/ml ,0.25mg/ml ,0.125 mg/ml, 0.0625 mg/ml, 0.03125mg/ml ,0.015625 mg/ml et 0.0078125 mg/ml (en _ug on a : 500,250, 125,62.5, 31.25 ; 15.625 et 7.8125) lors de l'ensemencement. Il s'agit de la technique de dilution d'ordre deux (Manya, 2008).

III.3.3. TEST IN VITRO SUR PLASMODIUM FALCIPARUM

Ce test a été effectué au laboratoire biomédical des cliniques Universitaires de Lubumbashi suivant la méthode de Rieckman. La recherche et la quantification des parasites ont été effectuées à l'aide d'un microscope électrique binoculaire (objectif X100) sur des étalements minces de sang colorés au GIEMSA 10% pendant 10 minutes. Un prélèvement de 2ml de sang veineux est effectué chez un patient sélectionné. Le sang est recueilli dans un tube contenant l'héparine pour le rendre incoagulable.

III.3.3.1. Source du parasite

La source du parasite (Plasmodium falciparum) est le sang d'un paludéen. Ce sang a été fourni par les cliniques universitaires .Le choix a été porté sur ce malade car il possédait une forte parasitémie (GE ++++) et aussi car il n'avait pas pris le traitement antipaludique dans les deux semaines précédent le diagnostic parasitologique.

Le choix porté sur plasmodium d'un sujet de Lubumbashi est motivé par le souci de travailler sur les souches présentes dans la population cible.

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III.3.3.2. Milieu de culture

Le milieu de culture utilisé est un milieu homologué par l'OMS. Ce milieu comprend : Le RPMI Stock, le NaHCO3, la gentamycine et le sérum humain.

> Le Milieu RPMI Stock est constitué par :

Tableau VI Composition du milieu RPMI stock

Milieu RPMI 1640 10,42g

Tampon HEPES 5, 94g

Hypoxanthine 50g

Glucose 2g

Eau bi distillée 1,130ml

Pour ce milieu RPMI Stock, le pH doit être ajusté à 7,2 avec le NaOH 1N. Ce milieu est stérilisé par filtration sur Sartorius 0,22_um et sa conservation se fait au réfrigérateur pendant #177;1mois au maximum à +4°C.

> Milieu de lavage : c'est le milieu RPMI Stock. > Milieu de culture avec comme composition :

Tableau VII Composition du milieu de culture pour le test in vitro

RPMI Stock 100ml

Solution de NaHCO3 à 5% 4ml

Solution de gentamycine 1ml

Sérum humain 10ml

La solution de NaHCO3 est stérilisée par filtration sur Sartorius 0,22_um. Les différents mélanges à répartir dans les puits sont obtenus en mélangeant 1ml de sang impaludé à 9ml du mélange ci-haut.