Memoire Online - Evaluation du potentiel ovarien pour la production in vitro d'ovocytes fécondables dans le plateau de l'Adamaoua

Cette étude a porté sur 201 vaches qui provenaient principalement du département de la Vina (Région de l'Adamaoua) et du département du Mayo- Rey (Région du Nord). Seules les vaches zébus ont été considérées.

Dans les zones d'origine, les animaux sont élevés de façon extensive. Ils paissent dans les pâturages communautaires à l'exception des ranchs qui disposent d'étendues plus ou moins délimitées et clôturées. Bien que les éleveurs soient de plus en plus sédentarisés, il existe encore des clans nomades (Mbororo notamment) mais presque tous les éleveurs pratiquent la transhumance en saison sèche, à la recherche d'eau et du fourrage pour leurs animaux. A côté de cela, se trouvent également d'autres systèmes notamment les systèmes semi-extensif et intensif où on note l'intervention de l'homme dans l'amélioration des performances de production et de reproduction à travers la complémentation et la supplémentation de l'aliment, l'application d'un programme de prophylaxie et la pratique des inséminations artificielles. Les soins vétérinaires sont limités aux campagnes de masse (vaccinations contre les épizooties, traitements curatifs et préventifs contre les trypanosomoses, etc...).

La race a été identifiée sur les bases des caractéristiques phénotypiques telles que décrites par Lhoste (1969).

Les zébus M'Bororos sont des animaux de grand format. La tête est longue et le cornage, long et puissant, présente en général une forme de lyre haute. L'encolure est longue et peu musclée ; la croupe est peu charnue, la poitrine est étroite mais profonde. Parmi ces groupes se distinguent trois races :

C'est un animal de grand format, de robe blanche parfois mouchetée avec des muqueuses foncées. Le mufle, les oreilles et les onglons sont en général noirs.

La variété Djafoun est caractérisée par une robe acajou uniforme et par des cornes en forme de lyre implantées haut.

C'est un animal de taille moyenne caractérisé par une robe crème, une bosse peu développée et l'absence des cornes.

D'après les enquêtes menées auprès des bouchers à l'abattoir, 61% des animaux étudiés provenaient du département de la Vina et 39% du département du Mayo Rey. Ces origines correspondent en réalité aux marchés à bétail où les achats des animaux ont été effectués ; les origines réelles des animaux étaient difficiles à déterminer du fait qu'un même animal peut transiter par plusieurs marchés à bétail.

Avant l'abattage, le périmètre thoracique (PTHO) de chaque vache a été mesuré avec le mètre ruban. Le poids a été calculé selon la formule : poids (kg) = 124,69 - 3,171 x PTHO + 0,0276 x PTHO² (Njoya et al., 1997).

Chaque vache a été examinée avant l'abattage pour déterminer sa note d'état corporel selon une grille de notation allant de 0 à 5 d'après Vall et al. (2003). La note d'état corporel globale a été estimée pour chaque vache par :

- La note du flanc dont les repères anatomiques sont la pointe de la hanche, les apophyses transverses et épineuses ;

- La note arrière dont les repères anatomiques sont la base de la queue et la pointe des fesses, le ligament sacro-tubéral, le détroit caudal et la ligne du dos.

C'est en fonction de la proéminence de ces repères et de l'aspect saillant des os sous-jacents que l'on attribue une note allant de 0 à 5. Le tableau I présente les grilles d'évaluations de la NEC. Ces repères ont été complétés par la palpation des amas graisseux superficiels : les abords, le grasset, la côte.

Les vaches ont été classées en 3 catégories selon Natumyana et al. (2008) : note 1-2 : maigre ; note 3 : Moyenne ; note 4-5 : grasse.

Après l'abattage, l'âge a été déterminé par l'examen de la dentition ou des cornes.

Pour la détermination de l'âge par les cornes, la formule suivante a été utilisée : Age (en années) = N + 2, avec N représentant le nombre des sillons et 2 une constante.

Les vaches ont été classées en groupes d'âges : 3 = âge < 6 ans, 6 = âge < 10 ans et 10= âge = 15 ans selon Lucyna et Zdzislaw (1984).

Après l'abattage et l'éviscération, l'utérus a été examiné afin de déterminer l'état physiologique de la vache. Si celle-ci est gravide, le foetus était retiré par incision de l'utérus et son âge approximatif déterminé à partir de la formule Y= X (X+2) où X représente le nombre de mois de gestation, 2 une constante et Y la longueur nuque-croupe en centimètres (Santos et al., 2013). La longueur nuque-croupe était mesurée à partir de l'éminence frontale jusqu'à la jonction sacrée-coccygienne (ischium). Le stade de gravidité a été ensuite classé en premier trimestre (1 à 90 jours), deuxième trimestre (91 à 180 jours) et troisième trimestre (> à 180 jours).

Après identification et abattage de chaque vache, les ovaires ont été prélevés par section du ligament large à l'aide des ciseaux. Ensuite, l'ovaire droit est placé dans un tube conique contenant un milieu isotonique (NaCl, 0.9%) avec la pénicilline-streptomycine (0,5 mg/ml), et l'ovaire gauche dans un autre. Après la collecte, les tubes contenant les ovaires ont été mis dans un container isotherme à la température de 30-32° C, puis transportés au laboratoire endéans les 2 heures qui suivaient l'abattage. Les ovaires présentant des pathologies (kystes) ont été exclus (Wang et al., 2007).

Au laboratoire, les ovaires ont été débarrassés de débris tissulaires (ligament large attachés sur l'ovaire) et ont été pesés avec une balance électronique de type Mettler PC 2000 (photo n° 6) avec une précision de 0,01. En fonction de leur poids, les ovaires ont été répartis en trois groupes : petits (< à 3 g), moyens (3 à 5 g) et gros (> à 5 g).

La taille (longueur, largeur et épaisseur) de l'ovaire a été mesurée à l'aide d'un calliper électronique (Photo n° 7). En fonction de ce facteur, les ovaires ont été répartis en deux groupes : volume ovarien inférieur à 2,25x1,75x1,25 cm³ et supérieur à 2,25x1,75x1,25 cm³ (Samad et Raza., 1999).

Le corps jaune (photo n° 8) est une glande endocrine transitoire du fait de sa durée éphémère. C'est une structure qui est formée à partir du follicule qui a ovulé. Son identification sur l'ovaire était basée sur sa forme et sa couleur. Le corps jaune mature a une forme en « bouchon sphérique », et une couleur grise.

Pour chaque vache, les follicules visibles (photo n° 9) à la surface de l'ovaire ont été comptés. Le diamètre folliculaire a été mesuré et les follicules ont été classés en 3 catégories : petits (CD < 3 mm), moyens (3 = CD = 8 mm) et gros (CD > 8 mm) selon Duygu et al. (2013). Les ovaires ont été ensuite rincés avec une solution physiologique de NaCl à 0,9 % contenant de la pénicilline-streptomycine à la dose de 0,5 mg/ml. Ils ont été gardés dans un bain marie à une température de 30° C pendant toute la durée de leur examen.

Les données ont été analysées avec le logiciel Statistical Package for Social Sciences (SPSS), version 20. Le test de Shapiro-Wilk a été utilisé pour le test de normalité des observations ou valeurs. Les données des follicules et ovocytes qui ne suivent pas une distribution normale ont été transformées par le logarithme Népérien. L'analyse de la variance (ANOVA) à un facteur a été effectuée pour évaluer l'effet des facteurs ovariens et non ovariens sur la population folliculaire, le rendement et la qualité ovocytaire. Les différences entre moyennes ont été testées par le test de Duncan's. Pour les données non normales, le test de Krustal-Wallis a été utilisé pour la comparaison des différentes moyennes. Toutes les données ont été représentées sous la forme de moyenne #177; ESM (Erreur Standard de la Moyenne) au seuil de 5 %.

Sur les 201 vaches étudiées, 92 étaient de race Goudali, 50 de race White Fulani (Akou), 31 de race Red Fulani (Djafoun) et 20 de race Bokolo (figure 10).

I.1.2. Age

L'âge des vaches abattues variait entre 3 et 15 ans. Avec une moyenne de 6,80 #177; 0,15, la plupart des vaches avait un âge compris entre 6 et 10 ans (tableau III).

L'évaluation morphologique des vaches a montré que la note d'état corporel des vaches abattues variait entre 1 et 5 ; avec une moyenne de 2,67#177;0,06. Plus de la moitié (59,7 %) des vaches avaient une NEC = 3 (figure 11).

Figure 11 : Distribution des vaches en fonction de la NEC I.1.4. Statut physiologique

Plus de la moitié (52,2%) des vaches étaient gravides. Le tableau IV présente leur répartition en fonction de leur statut physiologique et de la gravidité.

Cent quarante vaches (69,7%) possédaient un corps jaune sur l'un ou l'autre ovaire contre soixante une (30,3%) qui n'en possédaient pas.

Le poids moyen de l'ovaire était de 4,60#177;1,82 g et ceux de l'ovaire droit et gauche de 4,99#177;2,48g et 4,22#177;2,15 g respectivement. Il est à noter que l'ovaire droit pèse plus que l'ovaire gauche. Le poids moyen des vaches était de 382,08#177;70,73 Kg.

Le tableau V présente la variation du poids des ovaires et des vaches en fonction de la race, de la NEC, de l'âge, du statut physiologique et de la présence ou non du corps jaune. Il ressort de ce tableau que les vaches gravides ont des ovaires plus lourds (P < 0 ,05). De même, les ovaires porteurs de corps jaune sont plus lourds (P < 0 ,05). La race et l'âge des vaches n'ont aucun effet (P > 0 ,05) sur le poids des ovaires, alors que la note d'état corporel a une influence significative. Les ovaires des vaches ayant une NEC = 3 sont plus lourds (p < 0,05). Bien que la race Goudali ait tendance à avoir un poids plus élevé que les autres races, la différence n'est pas significative (p > 0,05). Par contre, le poids des vaches augmente de façon significative (p < 0,05) avec la note d'état corporel, la présence du corps jaune et de l'état gravidique.

Tableau V : Variation du poids des ovaires et des vaches en fonction de la race, de la NEC, de l'âge, du
statut physiologique et du corps jaune (moyenne #177; ESM)

Facteurs		N	Poids moyen ovaire droit	Poids moyen Ovaire gauche	Poids Moyen ovaire	Poids de l'animal
	Akou	50	5,07#177;0,32^a	4,20#177;0,26^a	4,63#177;0,23^a	348,27#177;7,97^a
	Bokolo	20	4,99#177;0,87^a	3,41#177;0,36^a	4,20#177;0,27^a	354,90#177;12,76^a
Race	Djafoun	31	4,62#177;0,58^a	4,56#177;0,42^a	4,59#177;0,42^a	364,35#177;13,35^a
	Goudali	92	5,05#177;0,24^a	4,28#177;0,23^a	4,67#177;0,18^a	373,72#177;6,70^a
	P-value		0,546	0,675	0,776	0,654
	Faible	81	4,35#177;0,24^a	3,78#177;0,22^a	4,06#177;0,18^a	339,05#177;5,51^a
NEC	Moyenne	93	5,30#177;0,26^b	4,45#177;0,24^b	4,87#177;0,26^a	366,07#177;6,88^b
	Elevée	27	5,82#177;0,55^b	4,70#177;0,37^b	5,26#177;0,31^b	424,70#177;11,11^c
	P-value		0,007	0,027	0,002	0,000
	3 - 6	55	4,79#177;0,28^a	3,87#177;0,22^a	4,33#177;0,19^a	357,44#177;9,86^a
Age	6 - 10	108	5,12#177;0,25^a	4,28#177;0,21^a	4,70#177;0,18^a	372,32#177;5,43^a
	10 - 15	38	4,87#177;0,45^a	4,52#177;0,42^a	4,69#177;0,33^a	373,81#177;10,65^a
	P-value		0,923	0,063	0,441	0,581
Statut	Non gestante	96	4,26#177;0,20^a	3,54#177;0,18^a	3,90#177;0,16^a	339,09#177;5,83^a
	Gestante	105	5,65#177;0,26^b	4,84#177;0,22^b	5,24#177;0,17^b	384,97#177;6,23^b
physiologique	P-value		0,000	0,000	0,000	0,000
	Absent	61	3,57#177;0,18^a	3,22#177;0,16^a	3,39#177;0,16^a	333,29#177;7,60^a
Corps jaune	Présent	140	5,60#177;0,22^b	4,22#177;0,15^b	5,12#177;0,15^b	376,03#177;5,32^b
	P-value		0,000	0,009	0,000	0,000

a,b,c :les moyennes dans une colonne avec des exposants différents sont significatives (P<0,05)

Les dimensions moyennes de l'ovaire étaient de 2,78#177;0,55 cm pour la longueur, 1,90#177;0,42 cm pour la largeur et de 1,27#177;0,33 cm pour l'épaisseur.

Le tableau VI montre la variation de la taille de l'ovaire en fonction de la race, de la NEC, de l'âge, du statut physiologique et de la présence ou non du corps jaune.

Il ressort de ce tableau que : la longueur de l'ovaire augmente significativement avec l'âge (p < 0,05) ; l'épaisseur de l'ovaire est plus réduite (p < 0,05) chez les vaches maigres. Les dimensions des ovaires augmentent avec l'état gravidique et la présence du corps jaune (p < 0,05).

Tableau VI : Variation de la taille des ovaires en fonction de la race, de la NEC, de l'âge, du statut physiologique et de la présence ou non du corps jaune (moyenne#177;ESM).

FACTEURS		N	Longueur moyenne OG	Longueur moyenne OD	Longueur moyenne ovaire	Largeur Moyenne OG	Largeur moyenne OD	Largeur moyenne ovaire	Epaisseur moyenne OG	Epaisseur moyenne OD	Epaisseur moyenne Ovaire
	Akou	58	2,67#177;0,54^a	2,91#177;0,55^a	2,79#177;0,06^a	1,84#177;0,37^a	1,97#177;0,39^a	1,90#177;0,04^a	1,21#177;0,27^a	1,33#177;0,33^a	1,27#177;0,03^a
	Bokolo	20	2,61#177;0,52^a	2,74#177;0,37^a	2,68#177;0,08^a	1,75#177;0,44^a	2,07#177;0,49^a	1,91#177;0,05^a	1,09#177;0,33^a	1,34#177;0,35^a	1,21#177;0,55^a
Races	Djafoun	31	2,78#177;0,47^a	2,86#177;0,58^a	2,82#177;0,09^a	1,95#177;0,45^a	1,84#177;0,45^a	1,89#177;0,06^a	1,31#177;0,33^a	1,26#177;0,41^a	1,29#177;0,05^a
	Goudali	92	2,68#177;0,59^a	2,86#177;0,55^a	2,77#177;0,05^a	1,82#177;0,42^a	1,97#177;0,43^a	1,90#177;0,03^a	1,25#177;0,34^a	1,35#177;0,52^a	1,30#177;0,03^a
	p-value		0,716	0,681	0,767	0,354	0,274	0,998	0,100	0,797	0,565
	Faible	81	2,60#177;0,51^a	2,76#177;0,48^a	2,68#177;0,05^a	1,77#177;0,40a	1,84#177;0,40^a	1,81#177;0,03^a	1,15#177;0,29^a	1,22#177;0,31^a	1,18#177;0,02^a
	Moyenne	93	2,76#177;0,60^a	2,93#177;0,60^a	2,85#177;0,06^a	1,88#177;0,42^a	2,04#177;0,43^a	1,96#177;0,03^b	1,29#177;0,33^b	1,40#177;0,52^b	1,34#177;0,03^b
NEC	Elevée	27	2,72#177;0,44^a	2,93#177;0,43^a	2,82#177;0,06^a	1,89#177;0,40^a	1,96#177;0,43^a	1,97#177;0,04^b	1,31#177;0,34^b	1,42#177;0,42^b	1,36#177;0,05^b
	p-value		0,129	0,094	0,066	0,175	0,055	0,052	0,007	0,014	0,002
	3 - 6 ans	55	2,50#177;0,46^a	2,67#177;0,46^a	2,58#177;0,05^a	1,77#177;0,33^a	1,93#177;0,35^a	1,85#177;0,03^a	1,28#177;0,34^a	1,32#177;0,30^a	1,30#177;0,03^a
Age	6 À 10 ans	108	2,75#177;0,55^b	2,94#177;0,55^b	2,84#177;0,05^b	1,87#177;0,44^a	1,99#177;0,34^a	1,92#177;0,03^a	1,23#177;0,30^a	1,31#177;0,34^a	1,27#177;0,02^a
	10 - 15 ans	38	2,81#177;0,60^b	2,92#177;0,54^b	2,86#177;0,08^b	1,84#177;0,43^a	1,93#177;0,53^a	1,89#177;0,06^a	1,19#177;0,35^a	1,40#177;0,76^a	1,29#177;0,07^a
	p-value		0,009	0,007	0,003	0,348	0,658	0,302	0,376	0,575	0,763
Statut	Non gestante	96	2,53#177;0,49^a	2,70#177;0,47^a	2,62#177;0,04^a	1,70#177;0,37^a	1,88#177;0,39^a	1,79#177;0,03^a	1,14#177;0,29^a	1,22#177;0,30^a	1,18#177;0,02^a
physio-	Gestante	105	2,84#177;0,56^b	3,01#177;0,56^b	2,92#177;0,05^b	1,96#177;0,41^b	2,04#177;0,45^b	2,00#177;0,03^b	1,32#177;0,33^b	1,42#177;0,52^b	1,37#177;0,02^b
logique	p-value		0,000	0,000	0,000	0,000	0,010	0,000	0,000	0,001	0,000
	Absent	61	2,56#177;0,50^a	2,64#177;0,43^a	2,60#177;0,05^a	1,66#177;0,29^a	1,72#177;0,26^a	1,69#177;0,03^a	1,07#177;0,19^a	1,11#177;0,19^a	1,09#177;0,02^a
Corps jaune	Présent	140	2,75#177;0,56^b	2,96#177;0,55^b	2,85#177;0,04^b	1,92#177;0,43^b	2,06#177;0,45^b	1,99#177;0,02^b	1,30#177;0,34^b	1,43#177;0,48^b	1,36#177;0,02^b
	p-value		0,024	0,000	0,001	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000	0,000

a,b,c :les moyennes dans une colonne avec des exposants différents sont significatives (P<0,05) OD : Ovaire Droit, OG : Ovaire Gauche

Quatre mille quatre cent onze (4411) ovocytes de qualité I, II, III et IV ont été récoltés des 402 ovaires, soit un rendement moyen en ovocytes par ovaire de 10,97#177;0,43.

Les ovocytes ont été classés en quatre qualités : I, II, III et IV (photo n° 10).

La figure 13 présente la répartition des ovocytes (moyenne #177;ESM) en fonction de leur qualité. Les ovocytes jugés de bonne qualité pour la maturation et la fécondation in vitro (qualité I et II) représentent une moyenne de 6,27#177;0,32 par ovaire soit un pourcentage de 57,15% (2515). L'index de la qualité ovocytaire (IQO) était de 2,26.

I.5. Effet des facteurs ovariens sur la population folliculaire, le rendement et la qualité des ovocytes.

Les tableaux VII et VIII présentent l'effet de la localisation ovarienne, de la présence ou non du corps jaune, du poids et de la taille de l'ovaire sur la population folliculaire, le rendement et la qualité des ovocytes.

Tableau VII: Variation du nombre des follicules en fonction des facteurs ovariens (moyenne #177; ESM)

Facteurs		N	Nombre des follicules/ovaire			Follicules totaux/ovaire
Facteurs		N	Petits (< 3mm)	Moyens (3-8 mm)	Gros (> 8 mm)
Localisa-	Droit	201	8,24#177;0,62^a	8,45#177;0,47^a	0,25#177;0,04^a	16,95#177;0,86^a
tion	Gauche	201	8,55#177;0,64^a	7,83#177;0,48^a	0,18#177;0,03^a	16,57#177;0,88^a
ovarienne	p-value					0,756
Corps	Absent	260	8,99#177;0,57^a	7,31#177;0,38^a	0,23#177;0,03^a	16,53#177;0,73^a
jaune	Présent	142	7,31#177;0,70^a	9,68#177;0,64^b	0,18#177;0,03^a	17.17#177;1,12^a
	P-value					0,623
Poids de	< 3	134	5,33#177;0,52^a	5,74#177;0,49^a	0,25#177;0,04^a	11,32#177;0,79^a
l'ovaire	3 - 5	134	7,55#177;0,65^b	7,94#177;0,53^b	0,24#177;0,04^a	16,47#177;0,88^b
(g)	>5	134	11,41#177;0,99^c	10,75#177;0,63^c	0,16#177;0,03^a	22,49#177;1,26^c
	P-value					0,000
volume de	<2,25x1,75x1,25	142	5,07#177;0,40^a	6,21#177;0,40^a	0,29#177;0,05^a	11,57#177;0,60^a
l'ovaire	>2,25x1,75x1,25	174	10,81#177;0,79^b	10,72#177;0,60^b	0,18#177;0,03^a	21,71#177;1,10^b
(cm³)	P-value					0,000

a,b,c :les moyennes dans une colonne avec des exposants différents sont significatifs

Tableau VIII : Variation du rendement et la qualité des ovocytes en fonction des facteurs ovariens (moyenne#177;ESM).

Facteurs		N	Rendement ovocytaire/ovaire		Qualité ovocytaire			Ovocytes cultivables
Facteurs		N	Rendement ovocytaire/ovaire	I	II	III	IV	I et II (%)
Localisation	Droit	201	11,28#177;0,62^a	3,55#177;0,22^a	2,83#177;0,18^a	2,30#177;0,17^a	2,60#177;0,26^a	6,38#177;0,36^a (56,56)
ovarienne	Gauche	201	10,67#177;0,60^a	3,52#177;0,21^a	2,62#177;0,18^a	2,17#177;0,17^a	2,36#177;0,19^a	6,13#177;0,35^a (57,45)
	p-value		0,756					0,631
Corps	Absent	260	11,51#177;0,53^a	3,58#177;0,19^a	2,86#177;0,16^a	2,37#177;0,15^a	2,70#177;0,21^a	6,44#177;0,31^a (55,95)
jaune	Présent	142	9,99#177;0,75^a	3,45#177;0,28^a	2,47#177;0,19^a	2,08#177;0,19^a	2,07#177;0,24^a	5,92#177;0,43^a (59,25)
	P-value		0,095					0,330
Poids de	< 3	134	8,44#177;0,59^a	2,66#177;0,22^a	2,09#177;0,22^a	1,78#177;0,18	1,90#177;0,21	4,75#177;0,35^a (56,27)
l'ovaire	3 - 5	134	11,39#177;0,74^b	3,51#177;0,24^b	3,51#177;0,24^b	2,29#177;0,20	2,59#177;0,33	6,50#177;0,44^b (57,07)
(en g)	>5	134	13,09#177;0,84^b	4,43#177;0,32^b	4,43#177;0,32^b	2,64#177;0,23	2,93#177;0,28	7,51#177;0,48^b (57,37)
	P-value		0,000					0,000
Volume de	<2,25x1,75x1,25	142	8,57#177;0,57^a	2,65#177;1,93^a	2,15#177;0,17^a	1,68#177;0,17^a	2,08#177;0,22^a	4,80#177;0,33^a (56,00)
l'ovaire (cm³)	>2,25x1,75x1,25	174	12,57#177;0,73^b	4,14#177;0,26^b	3,16#177;0,21^b	2,58#177;0,19^b	2,69#177;0,23^a	7,30#177;0,42^b (58,07)
	P-value		0,000					0,000

a,b,c :les moyennes dans une colonne avec des exposants différents sont significatifs (P<0,05).

La position gauche ou droite de l'ovaire n'a aucun effet significatif (P > 0,05) sur la population folliculaire, le rendement et la qualité des ovocytes. Toutefois, l'ovaire droit a tendance à avoir plus de follicules et d'ovocytes que l'ovaire gauche.

Le corps jaune n'a aucun effet significatif (P > 0,05) sur le nombre de petits (diamètre < à 3 mm), gros (diamètre > à 8 mm) et follicules totaux. Par contre, les ovaires porteurs de corps jaunes ont plus (P < 0,05) de follicules moyens.

Les ovaires ne portant pas de corps jaune ont tendance à avoir un rendement plus élevé en ovocytes totaux et en ovocytes cultivables. Aucune différence significative n'est observée en terme de qualité ovocytaire entre les ovaires ipsi et contra-latéraux au corps jaune.

Le poids de l'ovaire influence de façon significative la population folliculaire totale, le rendement et la qualité ovocytaire. Cependant, il n'a aucun effet significatif (P > 0,05) sur le nombre moyen des gros follicules.

Il ressort du tableau VII que les ovaires dont le volume est supérieur à 2,25x1,75x1,25 cm³ ont plus (P < 0,05) de follicules totaux que ceux dont le volume est moindre. Cependant le nombre des gros follicules ne diffère (P > 0,05) pas entre ces deux groupes.

De même, le rendement en ovocytes totaux et en ovocytes cultivables est plus élevé (P < 0,05) dans les ovaires ayant un volume supérieure à 2,25x1,75x1,25 cm³ (tableau VIII).

I.6. Variation de la population folliculaire, du rendement et de la qualité des ovocytes en fonction des facteurs non ovariens.

Les tableaux IX et X présentent l'effet de la race, de l'âge, de la NEC, du statut physiologique et du stade de la gestation sur la population folliculaire, le rendement et la qualité ovocytaire.

Tableau IX : Variation de la population folliculaire en fonction des facteurs non ovariens (moyenne #177; ESM)

Facteurs		N	Nombre de follicules/ovaire			Follicules totaux
Facteurs		N	Petits (< 3mm)	Moyens (3-8mm)	Gros (> 8mm)	/ovaire
	Akou	58	9,60#177;1,20^a	7,63#177;0,91^a	0,19#177;0,03^a	17,39#177;1,74^a
Race	Bokolo	20	7,80#177;2,04^a	8,00#177;1,26^a	0,25#177;0,07^a	16,02#177;2,45^a
	Djafoun	31	9,10#177;1,83^a	8,22#177;1,03^a	0,22#177;0,06^a	17,47#177;2,42^a
	Goudali	92	7,53#177;0,76^a	8,48#177;0,62^a	0,20#177;0,04^a	16,27#177;1,10^a
	P-value					0,170
	3 -6 ans	55	8,52#177;1,08^a	8,55#177;0,67^a	0,34#177;0,05^a	17,42#177;1,38^a
Age	6 -10 ans	108	8,61#177;0,86^a	9,14#177;0,59^a	0,17#177;0,02^b	17,76#177;1,13^a
	10 -15 ans	38	7,59#177;1,34^a	4,74#177;1,06^b	0,13#177;0,04^b	12,46#177;2,16^b
	P-value					0,043
	Faible	81	7,61#177;0,79^a	6,68#177;0,63^a	0,20#177;0,03^a	14,48#177;1,14^a
NEC	Moyenne	93	8,98#177;0,99^a	9,78#177;0,68^b	0,22#177;0,03^a	18,99#177;1,35^b
	Elevée	27	8,74#177;1,71^a	6,91#177;0,86^a	0,18#177;0,05^a	15,85#177;2,05^a
	P-value					0,038
Statut	Non gravide	96	9,23#177;0,79^a	7,55#177;0,64^a	0,29#177;0,03^a	17,00#177;1,26^a
physio-	Gravide	105	7,63#177;0,79^a	8,69#177;0,59^a	0,31#177;0,03^a	16,52#177;1,11^a
logique	P-value					0,781
	1er trimestre	53	8,20#177;1,34^a	9,60#177;0,93^a	0,27#177;0,05^a	18,08#177;1,82^a
Stade de	2e trimestre	32	7,48#177;1,25^a	8,50#177;0,88^a	0,17#177;0,05^b	16,12#177;1,69^a
gravidité	3e trimestre	20	6,37#177;0,94^a	6,60#177;1,15^a	0,12#177;0,05^c	13,05#177;1,74^a
	P-value					0,431

a,b,c :les moyennes dans une colonne avec des exposants différents sont significatifs (P<0,05)

Tableau X : Variation du rendement et de la qualité des ovocytes en fonction des facteurs non ovariens (moyenne#177;ESM)

Facteurs		N	Rendement ovocytaire		Qualité ovocytaire			Ovocytes cultivables
Facteurs		N	Rendement ovocytaire	I	II	III	IV	I et II (%)
	Akou	58	11,39#177;1,03^a	3,63#177;0,28^a	2,65#177;0,28^a	2,42#177;0,58^a	2,74#177;0,42^a	6,27#177;0,60^a (55,12)
	Bokolo	20	11,07#177;1,93^a	2,95#177;0,45^a	3,27#177;0,63^a	2,27#177;0,47^a	2,42#177;0,69^a	6,22#177;1,02^a (56,21)
Race	Djafoun	31	10,79#177;1,82^a	3,75#177;0,65^a	2,55#177;0,40^a	2,10#177;0,19^a	2,21#177;0,53^a	6,31#177;0,99^a (58,41)
	Goudali	92	10,75#177;0,76^a	3,53#177;0,26^a	2,70#177;0,22^a	2,23#177;0,15^a	2,41#177;0,26^a	6,23#177;0,45^a (58,00)
	P-value		0,809					1,000
	3 - 6	55	12,23#177;0,95^a	3,77#177;0,28^a	2,94#177;0,27^a	2,60#177;0,32^a	2,91#177;0,37^a	6,72#177;0,49^a (54,97)
Age (années)	6 - 10	108	11,64#177;0,79^a	3,79#177;0,28^a	2,98#177;0,22^a	2,35#177;0,19^a	2,52#177;0,28^a	6,77#177;0,46^a (58,18)
	10 - 15	38	7,25#177;1,30^b	2,46#177;0,49^b	1,65#177;0,28^b	1,41#177;0,26^b	1,72#177;0,38^b	4,12#177;0,75^b (56,83)
	P-value		0,006					0,006
	Faible	81	9,59#177;0,82^a	2,93#177;0,26^a	2,44#177;0,25^a	1,89#177;0,21^a	2,31#177;0,34^a	5,38#177;0,48^a (56,08)
NEC	Moyenne	93	12,50#177;0,87^b	4,34#177;0,31^b	3,07#177;2,15^a	2,49#177;0,23^a	2,59#177;0,26^a	7,42#177;0,49^b (59,36)
	Elevée	27	9,87#177;1,52^a	2,55#177;0,41^a	2,33#177;0,38^a	2,41#177;0,43^a	2,57#177;0,58^a	4,89#177;0,75^b (49,54)
	P-value		0,034					0,003
Statut	Non gravide	96	12,05#177;0,85^a	3,62#177;0,27^a	2,98#177;0,24^a	2,53#177;0,23^a	2,90#177;0,32^a	6,61#177;0,48 (54,88)
physiologique	Gravide	105	9,99#177;0,75^b	3,46#177;0,28^a	2,48#177;0,19^a	1,97#177;0,18^b	2,08#177;0,24^a	5,93#177;0,44 (59,40)
	P-value		0,023					0,298
Stade	1er trimestre	53	11,33#177;1,27^a	3,87#177;0,45^a	2,82#177;0,33^a	2,23#177;0,29^a	2,41#177;0,39^a	5,26#177;0,72^a (59,00)
de gravidité	2e trimestre	32	9,41#177;0,98^a	3,47#177;0,42^a	2,30#177;0,25^a	1,92#177;0,29^a	1,72#177;0,31^a	5,76#177;0,59^a (61,29)
	3e trimestre	20	7,37#177;1,26^a	2,35#177;0,46^a	1,85#177;0,33^a	1,37#177;0,30^a	1,80#177;0,50^a	4,20#177;0,76^a (56,94)
	P-value		0,016					1,430

a,b,c :les moyennes dans une colonne avec des exposants différents sont significatifs (P<0,05)

La race n'a aucun effet significatif sur la population folliculaire totale (P > 0,05). Toutefois, les races Red Fulani et white Fulani ont tendance à avoir plus de follicules que les races Goudali et Bokolo.

Il n'existe aucune différence significative (P > 0,05) entre les races sur le rendement en ovocytes, la qualité et les ovocytes cultivables (P > 0,05). Toutes les races étudiées possèdent un pourcentage en ovocytes cultivables (I et II) supérieur à 50 %.

Les vaches âgées de plus de 10 ans ont moins de gros et moyens follicules (P < 0,05). De même, le rendement en ovocytes est plus élevé (P < 0,05) chez les vaches âgées de moins de 10 ans. Les ovocytes cultivables récoltés chez ces dernières représentent 61,13 % des ovocytes totaux.

La note d'état corporel exerce un effet significatif sur le nombre des follicules moyens et des follicules totaux. Les vaches ayant une NEC moyenne ont plus (P < 0,05) de follicules moyens et de follicules totaux que les vaches maigres et celles ayant une bonne NEC.

De même, les vaches ayant une NEC moyenne ont un rendement en ovocyte plus élevé (P < 0,05) que les vaches maigres et grasses. En ce qui concerne la qualité ovocytaire, les ovocytes de qualité I et les ovocytes cultivables sont plus nombreux (P < 0,05) chez les vaches ayant une NEC moyenne.

Le statut physiologique n'a aucun effet significatif (P > 0,05) sur la population folliculaire. Toutefois, les vaches non gravides ont tendance à avoir plus des follicules totaux que les vaches gravides.

Le statut physiologique exerce un effet significatif sur le rendement en ovocytes. Les vaches gravides ont moins (p < 0,05) d'ovocytes totaux, comparées aux vaches non gravides. En termes de qualité ovocytaire, les ovocytes de qualité III sont plus élevés (p < 0,05) chez les vaches non gravides. Les ovocytes de qualité I et II qui sont utilisés pour la maturation in vitro ne sont pas influencés par le statut physiologique. Toutefois, les vaches non gravides ont tendance à avoir plus d'ovocytes cultivables que les vaches gravides.

Les résultats montrent que l'âge de la gestation n'a aucun effet significatif (p > 0,05) sur le nombre des follicules totaux. Les vaches, au dernier trimestre de la gestation, ont tendance à avoir moins de follicules que les vaches aux premier et deuxième trimestres. Par contre, le stade de la gestation a un effet significatif sur le nombre de gros follicules. Les vaches au dernier trimestre de la gestation ont moins (P < 0,05) de gros follicules.

La gravidité influence le rendement en ovocytes. Les vaches au premier trimestre ont plus (P < 0,05) d'ovocytes que les vaches au dernier trimestre de gravidité. Cependant, il n'a aucun effet sur la qualité globale des ovocytes et sur la qualité des ovocytes cultivables.

L'âge moyen des vaches abattues (6,80 #177; 0,15) est similaire à celui observé par Bah et al. (2010). Selon ces auteurs, 39 % des vaches abattues à Ngaoundéré souffriraient des pathologies diverses qui, associées aux effets de la saison sèche et de la rareté des pâturages y relative auraient des répercussions sur les performances pondérales avec pour conséquence une note d'état corporel faible. La caractérisation des vaches indique que les zébus Mbororo (Akou et Djafoun) et les zébus Bokolo associés constituent 50,24 % des races. Ceci est dû au coût plus élevé du zébu Goudali. D'où le choix des bouchers porté vers les zébus Mbororo dont le prix est relativement plus bas.

Le poids moyen de l'ovaire des zébus étudiés est comparable à celui du zébu Ankolé (4,6#177;2,3 ; Natumanya et al., 2008), mais inférieur à celui de la vache Frisonne (10-19 ; Pierson et Ginther, 1987a) et de la vache Swedish Red (10,2 g ; Rajoski, 1960). Cette différence de poids entre les ovaires des zébus et des taurins peut être due à l'effet race. En effet le poids moyen des vaches abattues était inférieur à celui de la vache frisonne, soit 547793 kg (Laizeau, 2003). La différence de poids entre l'ovaire droit et gauche a également été rapportée par Rajoski (1960). En effet, les études de Pierson et Ghinter (1987a) et de Ghinter et al. (2014) ont montré que les ovulations sont plus fréquentes sur l'ovaire droit. Cette plus grande activité physiologique de l'ovaire droit serait donc responsable de son poids plus élevé. Par ailleurs, il a été démontré que le statut nutritionnel, la présence du corps jaune et celles des follicules influence la taille de l'ovaire (Pierson et Ginther, 1987a) ; d'où la corrélation positive observée entre la NEC, la présence du corps jaune, le statut physiologique et le poids des ovaires. L'âge n'a aucun effet sur le poids des ovaires, ceci s'expliquerait par le fait que toutes les vaches étudiées ont atteint leur maturité sexuelle et que le poids des ovaires augmente très peu après la puberté. Les dimensions de l'ovaire étaient inférieures à

celles des races européennes (Rajoski, 1960). La corrélation positive entre la note d'état corporel et l'épaisseur de l'ovaire s'expliquerait par une sous-alimentation qui influence négativement l'état général des animaux et par conséquent le poids des ovaires. Dans cette étude, la présence du corps jaune avait un effet positif sur les dimensions de l'ovaire.

La population folliculaire moyenne est comparable à celle obtenue par Carvalho et al. (2008) chez le Zébu Nellore. Le nombre des follicules de taille comprise entre 3 et 8 mm est similaire à celui du zébu Ankolé rapporté par Natumanya et al. (2008). Par contre, Dominguez (1995) a observé des valeurs plus élevées chez les races européennes. Ces différences sont probablement liées à la race et/ ou à l'environnement.

La présence du corps jaune n'a aucun effet sur la population folliculaire ; ceci est également rapporté par Natumanya et al. (2008). Par contre, Ghinter et al. (2014) pensent que le corps jaune a une influence positive sur le nombre de follicules ovariens si et seulement si un follicule dominant est également présent sur l'ovaire porteur du corps jaune. Cet effet s'expliquerait par les facteurs angiogéniques d'origine lutéale qui, en augmentant l'apport sanguin, stimuleraient également la croissance folliculaire au niveau de l'ovaire porteur du corps jaune. Ghinter et al. (2014) ont également observé une grande activité folliculaire sur l'ovaire droit portant un follicule dominant et/ou un corps jaune. Ceci s'expliquerait par la densité des vaisseaux sanguins qui favorisent un apport important de sang au niveau de l'ovaire droit ou alors par la présence des follicules primordiaux plus nombreux sur cet ovaire. La corrélation positive entre la taille de l'ovaire et la population folliculaire a également été rapportée par Samad et Raza (1999) et Wani et al. (1999) chez la bufflesse et la chèvre respectivement.

La race n'a aucun effet sur la population folliculaire. Santos et al. (2013) ont observé que la population folliculaire varie entre les individus d'une même race et entre les races. Dominguez (1995) a observé que les zébus ont moins de gros follicules, mais plus de follicules totaux que les taurins (Sartori et Barros, 2011).

Dominguez (1995) et Alves et al. (2014) ont observé le même effet de la NEC sur la population folliculaire. En effet, il a été observé que la sous-alimentation inhibe le mécanisme du rétrocontrôle exercé par l'oestradiol sur la FSH. Par ailleurs, la folliculogenèse basale est essentiellement contrôlée par les hormones de croissances telles que l'IGF-1 (Insuline Growth Factor-1). Lucy et al. (1992) ont montré que lors d'un déficit énergétique, il y a un ralentissement de la croissance folliculaire suite à une diminution des concentrations en IGF-

1. Une situation alimentaire favorable s'accompagnant des teneurs plasmatiques élevées en IGF-1 serait un stimulant de la croissance folliculaire. De plus, il augmente la sensibilité des cellules de la granulosa à la stimulation de la FSH (O'callaghan et Boland, 1999). Ryan et al. (1994) ont trouvé qu'il existe une corrélation entre les apports alimentaires suffisants et la concentration en IGF-1 dans le sang et la NEC. Les animaux ayant une NEC très élevée (4 et 5) ou faible (1 et 2) avaient des faibles concentrations en IGF-1 ; d'où la diminution de la croissance folliculaire.

L'âge influence significativement la population folliculaire. Son effet a également été rapporté par Lucyna et Zdzislaw (1984), et Fassi (2006). En effet, les travaux de Armstrong (2001) ont montré que le nombre des follicules diminue avec l'âge chez toutes les espèces. Ceci s'expliquerait par la défaillance de l'axe hypothalamo-hypophysaire, la déficience des hormones ovariennes et surtout l'apoptose des follicules, principales responsable de l'épuisement de la réserve ovarienne.

La gestation n'influence pas significativement la population folliculaire bien que Ginther et al. (1989) aient identifié des vagues de croissance folliculaire tous les 8 à 10 jours sans toutefois conduire à la sélection et à la dominance entre le 4^e et le 9^e mois de gestation. Par contre, une réduction du nombre de gros follicules avec l'âge du foetus a été rapportée par Dominguez (1995). De même, la présence du corps jaune gestatif a un effet négatif sur la croissance des follicules de diamètre supérieur à 7 mm après le 22^e jour de gestation (Pierson et Ginther, 1987b). La différence observée sur le nombre de gros follicules s'expliquerait par le fait que la sécrétion de la progestérone durant la gestation inhibe la sécrétion des gonadotropines hypophysaires (FSH et LH). En effet, la folliculogénèse terminale est dépendante d'un taux élevé des gonadotropines. En absence de ces hormones, les follicules en croissance n'atteignent que les stades des follicules préantraux.

La technique de slicing des ovaires permet de récolter les ovocytes présents dans tous les follicules quelle que soit leur localisation au niveau du cortex ovarien (Ward et al., 2000). Le rendement ovocytaire, comparable à celui rapporté par Wang et al. (2007) chez la vache Holstein, est néanmoins supérieur à celui rapporté par Armstrong (2001), Natumanya et al. (2008) et Abraham et al. (2012) soit 6,0#177;0,6 ; 4,05#177;0,77 et 3.33 #177; 1.03 mais inférieur aux 66 ovocytes rapportés par Carolan et al. (1992). Ces variations pourraient être liées à la technique d'incision qui produit beaucoup de débris tissulaires (Wani et al., 2000). D'autres auteurs se servent d'une lame à brin séparée de 1 mm pour inciser les follicules et d'un passoir. Un nombre important d'ovocytes serait donc retenu dans les ovaires sans être

récoltés, ou alors les ovocytes ont été désintégrés par la lame de bistouri durant l'incision des ovaires. Cette technique pourrait contribuer au faible rendement obtenu dans cette étude. Des investigations futures seraient également nécessaires pour évaluer, par des coupes histologiques, la localisation des follicules dans l'ovaire des zébus. L'index de la qualité ovocytaire obtenu est supérieur à 1. Ceci indique que la qualité globale des ovocytes est moyenne. Le taux d'ovocytes de qualité I et II à sélectionner pour la maturation in vitro se situe dans l'intervalle de 30- 60 % rapportés par Lucyna et Zdzislaw (1984) et Natumyana et al. (2008)

Les résultats obtenus ont montré que la quantité des ovocytes augmente avec le poids et la taille de l'ovaire. Or, peu d'études ont montré l'effet de la taille et du poids de l'ovaire sur la population folliculaire, le rendement et la qualité des ovocytes chez les bovins. Mais on constate que ceux obtenus par Samad et Raza (1999) chez la bufflesse et par Wani et al. (1999) chez la chèvre sont contraires. Ceci pourrait être dû à l'espèce. De même, Natumanya et al. (2008) montrent qu'il n'y a aucune influence du corps jaune sur le rendement et la qualité des ovocytes chez la vache Ankolé. Par contre, une corrélation positive entre la présence du corps jaune, le rendement et la qualité des ovocytes a été montrée chez la brebis (Wani et al., 1999), la bufflesse (Samad et Raza, 1999) et le dromadaire (Abdoon, 2001). Ces variations pourraient être dues à l'espèce.

Cette étude n'a révélé aucune influence de la race sur le rendement et la qualité des ovocytes. Ceci a également été rapporté par Abraham et al. (2012) chez les races Swedish Red et Swedish Holstein. Par contre, Dominguez (1995) et Fassi (2006) ont noté que les vaches de races européennes donnaient plus d'ovocytes que celles des races locales au Nord-Est du Mexique. Par ailleurs, de nombreuses études ont montré que la quantité et la qualité ovocytaire diminuaient avec l'âge (Lucyna et Zdzislaw, 1984; Natumanya et al., 2008). Ce qui corrobore nos résultats. En effet, notre étude montre que les jeunes animaux constituent les meilleurs donneurs d'ovocytes de bonne qualité. L'effet de la NEC et de la gestation sur le rendement et la qualité ovoytaire a été également rapporté par Dominguez (1995) et Natumanya et al. (2008). En effet, les changements métaboliques et hormonaux n'affectent pas seulement la croissance folliculaire mais aussi la croissance de l'ovocyte. Etant donné que la folliculogenèse et l'ovogénèse sont deux processus étroitement liés (Monniaux et al., 2009), la qualité des ovocytes dépend des conditions nutritionnelles sous lesquelles le follicule a commencé son développement c'est-à-dire au moment de son recrutement. En effet,

l'absence d'ovulation pendant la gestation est la conséquence de l'atrésie des ovocytes et ce n'est qu'entre le 30^e et 100^e jour post-partum que le nombre d'ovocytes augmente linéairement chez la vache (Kendrick et al., 1999).

Evaluation du potentiel ovarien pour la production in vitro d'ovocytes fécondables dans le plateau de l'Adamaoua

CHAPITRE II : MATÉRIEL ET MÉTHODES

I.1.2. Age