2.2.3- Dosage spectrophotométrique du
paracétamol dans le sang des patients présumés
intoxiqués au paracétamol :
Le dosage du paracétamol n'a porté que sur le
sang des deux patients admis pour intoxication médicamenteuse au CNT
d'Alger et au pavillon des urgences du CHU de TiziOuzou, respectivement.
Le but de ce dosage était l'évaluation du danger
encouru par ces personnes à travers une mesure de leurs
paracétamolémies.
2.2.3.1- Principe :
Ce dosage spectrophotométrique du paracétamol
repose sur la capacité qu'a le 3-nitro 4-hydroxyacétanilide,
produit par la réaction du paracétamol en milieu acide avec les
ions nitrites, de prendre une teinte jaune orangé en milieu alcalin
(Figure 15) et d'avoir un maximum d'absorption spécifique à 405
nm.
La paracétamolémie est déterminée par
référence à une courbe d'étalonnage obtenue
grâce à une gamme de solutions de paracétamol pur de
concentrations connues.
Figure 15 : Equations des réactions du
paracétamol avec les ions nitrites et du 3-
nitro
4-hydroxyacétanilide produit avec les ions hydroxydes.
2.2.3.2- Mode opératoire :
2.2.3.2.1- Préparation des solutions «
étalon » de paracétamol :
Des solutions « étalon » de
paracétamol de concentrations respectives de 0, 50, 100, 200 et 400mg/l,
sont préparées en dissolvant du paracétamol pur dans du
sérum blanc (sérum d'une personne n'ayant pas consommé de
paracétamol).
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2.2.3.2.2- Préparation des échantillons
:
Les échantillons de sang sont centrifugés pour
éliminer les cellules sanguines et le paracétamol est dosé
directement ensuite dans le sérum ainsi obtenu.
2.2.3.2.3- Préparation du mélange
réactionnel et mesure de l'absorbance : Ajouter 2ml d'acide
trichloracétique (100g/l) à 1ml de prise d'essai (sérum ou
solution « étalon ») puis mélanger et centrifuger
pendant 5 minutes (1er mélange).
Dans un autre tube, ajouter 1ml d'acide chlorhydrique (6N)
à deux 2ml de solution de nitrite de sodium (100g/l) et mélanger
(2ème mélange).
Ajouter 2ml du surnageant du premier mélange obtenu au
second mélange, agiter et laisser reposer pendants 2 à 3 minutes
à la température ambiante.
Ajouter 2ml de solution de sulfamate d'ammonium (150g/l) goutte
à goutte, pour éliminer l'excès d'acide nitreux.
Ajouter 2ml de solution d'hydroxyde de sodium (6M), agiter
rapidement pour éviter d'éventuelles bulles de gaz.
Mesurer l'absorbance à 405nm par rapport au blanc
préparé avec du sérum.
2.2.4- Détermination du bilan hépatique
:
Le bilan hépatique effectué consiste en le
dosage dans le sérum des principaux marqueurs moléculaires de
lésions hépatiques, que sont les transaminases (ASAT et ALAT),
les phosphatases alcalines (PAL), la gamma glutamyl transférase (GGT),
la bilirubine totale (T-BIL) et la bilirubine directe (D-BIL).
La quantification de tous ces paramètres a
été effectuée automatiquement en utilisant le doseur
Beckmann Coulter à système SYNCHRON CX-9 du Laboratoire Central
de Biochimie du CHU de Tizi-Ouzou (Figure 16).
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|
Figure 16 : Photographie du doseur Beckmann
Coulter à système SYNCHRON CX-9.
du Laboratoire Central de Biochimie du CHU de TiziOuzou.
|
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Pour tous les paramètres, cet appareil mesure la variation
de l'absorbance par rapport à un blanc, à la suite d'une
réaction en présence d'un réactif spécifique
(Tableau I).
Les espèces chimiques produites lors de chaque
réaction, absorbent chacune à une longueur d'onde qui lui est
spécifique (Tableau I).
Les principes de dosage de ces paramètres sont
cités en annexe 1.
Tableau I : Spécification des
réactifs pour doseur Beckmann Coulter à système SYNCHRON
CX-9.
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Réactif
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Composition
|
ë
d'absorption
(nm)
|
|
ASAT
|
á- cétoglutarate, malate
Déshydrogénase, L-aspartate, NADH.
|
340
|
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ALAT
|
á- cétoglutarate, lactate
déshydrogénase, L-alanine, Tampon tris, NADH.
|
340
|
|
PAL
|
p-Nitrophénylphosphate,
2-amino-2-méthyl-1-propanol.
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410
|
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GGT
|
ã-glutamyl-p-nitroaniline,
glycyl-glycine.
|
410
|
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T-BIL
|
Benzoate de sodium, caféine, acide sulfanique, acide
chlorhydrique, nitrite de sodium, acétate de sodium.
|
520
|
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D-BIL
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Acide sulfanique, acide chlorhydrique, Nitrite de sodium.
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560
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