4. Détermination de la composition biochimique de
Gracilaria gracilis
Des échantillons de 20 g ont été
décongelés puis séchés avec du papier absorbant. 1g
de cette biomasse fut broyé dans un mortier en présence de 20 ml
de tampon phosphate KH2PO4 de pH =6. Le broyat a été
homogénéisé à l'aide d'un vortex puis les extraits
ont été incubés dans un bain marie à 50°C
pendant 10 heures et filtrés à l'aide d'une membrane de 0.5 ?m de
diamètre. Le filtrat a été par la suite,
récupéré et centrifugé à 4000 rpm à
20°C pendant 15 minutes. Enfin, le surnageant a été
récupéré afin d'être utilisé pour le dosage
de la R-phycoérythrine (RPE), des protéines et des sucres
solubles (Annexe 6).
La teneur en protéines solubles a été
déterminée par la méthode de Bradford (Bradford, 1976)
(Annexe 7). C'est une méthode sensible et rapide. Ce dosage
détermine la concentration protéique basée sur une
réaction colorimétrique entre les protéines et le colorant
bleu de Coomassie G250. Ce réactif, rouge/brun à l'état
libre, prend une teinte bleue lorsqu'il se lie aux protéines et
possède un coefficient d'extinction molaire élevé dans le
visible (à 595 nm). La quantité de protéines Q (mg/g
d'algue fraiche), que renferme chaque échantillon a été
déterminée selon l'équation suivante : Q = 0.1*20*C. C
étant la concentration de protéines de l'échantillon,
dégagée à partir de la courbe d'étalonnage (Annexe
8).
Les teneurs de la RPE des différents
échantillons sont estimées par mesure de l'absorbance à
565 nm, longueur d'onde du maximum d'absorbance. Par ailleurs, les spectres
d'absorbance entre 450 nm et 600 nm de la phycoérythrine ont
été également établis. La loi de Beer-Lambert
établit l'absorbance à 565 nm par la formule suivante : A = ?
×I.×C1 = ? ×I.× / PM, Avec = A×260.000/ (2.106) =
0.13×A ; A : absorbance à 565 nm ; ? : coefficient d'extinction
molaire de la RPE ; l : longueur du trajet optique = 1 cm ; C1 :
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concentration molaire en phycoérythrine (M) ; :
concentration massique en RPE (mg/ml) ; PM : poids moléculaire de la
RPE.
Les sucres hydrosolubles ont été
déterminés par la méthode colorimétrique
modifiée de Dubois et al. (1956) (Annexe 9). Les sucres
simples, les oligosaccharides, les polysaccharides et leurs
dérivés forment du furfural ou de l'hydroxylméthyl
furfural lorsqu'on les traite avec du phénol et de l'acide sulfurique
concentré. La réaction est sensible et la coloration
orangée est stable. On peut ainsi doser les glucides totaux par
spectrophotométrie (490 nm). La quantité de sucre Q' (mg/g
d'algue fraiche) que renferme chaque échantillon a été
déterminée selon l'équation suivante : Q = 1*20*C. C
étant la concentration de sucres de l'échantillon,
dégagée à partir de la courbe d'étalonnage (Annexe
10).
Pour déterminer la teneur de l'algue en matière
sèche (MS), 2 g de matière première fraîche
coupé en particules de 3 mm sont mises à sécher à
l'étuve durant une nuit à 60°C. La masse de l'algue est
prise avant et après le séchage jusqu'à masse constante.
Le taux de MS est calculé selon la formule suivante :
% MS = (Masse de l'échantillon après séchage
x 100) / Masse de l'échantillon avant séchage.
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