II-2.4.1.11. Minéraux
La teneur en sodium, potassium, magnésium, phosphore,
calcium et fer sanguin est déterminée par la méthode
colorimétrique. Le phosphore inorganique présent dans le
sérum ou autres fluides de l'organisme réagit avec le molybdate
de sodium pour former le phospho-molybdate.
Ce dernier est ensuite converti par réduction avec le
1,2 hénylendiamine en molybdène colloïde bleu qui est enfin
déterminé par photométrie. Les concentrations en sodium
sont déterminées selon
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l'option ISE (option photométrie de flamme).
L'électrode Ion-Sélective (ISE) est un capteur
(sonde) utilisé dans la recherche biochimique et biophysique, où
des mesures de concentration ionique dans un soluté sont exigées,
habituellement sur une base en temps réel.
II-2.4.2. Numération des cellules sanguines
Les échantillons de sang ont été
prélevés dans les tubes contenant un anticoagulant (EDTA) et
utilisés pour déterminer les paramètres
hématologiques et la formule leucocytaire, à l'aide d'un automate
PLC (Beckmann Coulter Act Diff 2) de numération muni d'un système
volumétrique associé à un système
photométrique. Elle a permis le comptage des différentes cellules
sanguines (Leucocytes, Hématies, Hémoglobines,
Hématocrites, Volume Globulaire Moyen (VGM), Teneur Corpusculaire
Moyenne en Hémoglobine (TCMH), Concentration Corpusculaire Moyenne en
Hémoglobine (CCMH), plaquettes, Neutrophiles, Eosinophiles, Basophiles,
Lymphocytes et Monocytes) en 60 secondes.
II-2.4.3. Prélèvement des organes et
mesure de leur paramètres biométrique et leur étude
histologique
II-2.4.3.1. Prélèvement
Après le prélèvement du sang chez les
animaux sacrifiés, il est pratiqué une laparotomie longitudinale
afin d'isoler le coeur, le foie, la rate, les deux reins et la graisse
abdominale. Ces organes sont rincés immédiatement avec une
solution salée glacée (9g/L de NaCl) selon la méthode
décrite par Winter et al. (1994), puis
pesés avant d'être conservés au congélateur pour les
analyses futures. Les reins ainsi qu'un lobe de chaque foie sont
conservés dans des boîtes contenant du formol dilué au
10ème, afin d'effectuer dans la suite du travail des coupes
histologiques. Les poids des organes sont ramenés au pourcentage du
poids de l'animal obtenu pendant la dernière pesée des rats.
II-2.4.3.2. Paramètres biométriques
Les organes régulateurs de la nutrition retenus pour
cette étude, ont concerné les reins, le foie, la rate et le
coeur. Les poids de ces organes sont ramenés au pourcentage du poids des
animaux obtenu pendant la dernière pesée. Le poids relatif des
organes est obtenu à partir de la formule suivante :
(17)
Poids de l'organe (% PC) = X 100
PC=poids corporel
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II-2.4.3.3.Paramètres histologiques ? Technique de
montage
La technique utilisée pour l'histologie, est celle
décrite par Martoja & Martoja (1967), à
l'hématoxiline et éosine. Elle commence par la préparation
des organes prélevés jusqu'à leur observation. Les organes
(foies et reins) sont retirés des boîtes où ils
étaient conservés dans du formol 10 % pendant une semaine. Une
coupe longitidunale est effectuée sur chacun d'eux. Chaque coupe est
déposée sur une cassette préalablement codée en
fonction des différents lots. Les tissus hépatiques et
rénaux sont ensuite fixés dans du bain acqueux, puis une
déshydratation des pièces de foie et de rein est
réalisée dans des bains successifs d'alcool à
concentrations croissantes de 70 °, 95 ° et 100 °. Après
l'étape de la déshydration, dans les bains successifs d'alcool,
les pièces de foie et de rein sont introduites dans deux bains de
parafines mis à l'étuve à 60 °. Le premier bain a
duré 1 h 30 min et le second 2 h. Des blocs de parafine sont
confectionnés à l'aide des barres de Leucart, puis conserves
à + 4 ° pendant 24 h. Par la suite, des rubans de coupes sont
réalisés à l'aide de microtome (Type Mino) reglé
à 7 microns. Ces rubans sont ensuite déposés sur des lames
gélatinisées pour la fixation. Ces lames sont sechées dans
une étuve à 30 ° pendant 24 h. A la fin du séchage,
il est procédé au déparaffinage par hydratation des lames
dans une batterie contenant deux (2) bains de toluène, trois (3) bains
d'alcool à concentration décroissante (100 °, 95 °, et
75 °) et un (1) bain d'eau distillée.
? Coloration, observation et prise de vue
Deux colorations sont effectuées. La première
à l'hématoxyline de Groat puis rinçage à l'eau
courante, et la deuxième à l'éosine puis rinçage
à l'eau distillée. Une déshydratation des lames dans la
même batterie mais dans le sens contraire (3 bain d'alcool à
concentration croissantes 70 °, 95 ° et 100 °) est
effectuée. Enfin, les lames sont mises en contact avec les lamelles
à l'aide du baume de Canada. Lorsque le montage est terminé, les
différentes coupes sont observées à l'aide d'un microscope
photonique (Olympus BX40) couplé à un ordinateur de bureau de
marque acer avec un grandissement x 100 puis x 400. Les meilleurs
images observées ont été retenues.
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