I-6-2. Cytotoxicité de L. pneumophila
vis-à-vis des amibes
Des co-cultures des souches amibiennes ont également
été réalisés dans des tubes de culture cellulaire
contenant 3 ml d'une suspension de 6.104 amibes/tube,
infestées avec un ratio (bactéries/amibes) de 0,1 et 10, afin
d'évaluer quantitativement l'effet cytopathogène de la
bactérie vis-à-vis de l'amibe. La cytotoxicité a
été également déterminée au bout de 24 ; 48
et de 72 heures de co-culture par un test d'exclusion au bleu de
méthylène sur les souches amibiennes.
Etude de la relation entre des bactéries Legionella et
des amibes 12
Chapitre 2: Matériel et méthodes
Les amibes sont récupérées par
centrifugation douce des tubes de co-cultures, puis re-suspendues dans 200 uL
de milieu PYG ou SCGYEM avant d'être mélangées avec le bleu
de méthylène selon un ratio de 1/4. Les cellules sont
examinées à l'hématimètre et en déterminant
pour chaque souche amibienne le pourcentage de cellules apparaissant
colorées en bleu.
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