II.20- Procédé de phosphomolybdène
II.20.1- Principe
Ce procédé est une méthode
spectroscopique pour la détermination quantitative de la capacité
antioxydant, par la formation d'un complexe de phosphomolybdène. Le
dosage est basé sur la réduction de Mo (VI) en Mo (V) par
l'analyse de l'échantillon et la formation subséquente d'un vert
phosphate Mo (V) complexe à pH acide. Antioxydant totale capacité
peut être calculé par la méthode décrite par PRIETO
et al. (1999) (NUR ALAM, 2013).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.20.2-Dosage
Mettre 0,1 ml de l'échantillon (100 ug) solution est
combiné avec 1 ml de réactif (0,6 M d'acide sulfurique, 28 mM
sodium phosphate et mM de molybdate d'ammonium 4). Le tube est coiffé et
incubé dans un bain d'eau bouillante à 95C°
pendant 90 min. Après refroidissement de l'échantillon à
la température ambiante, l'absorbance de la solution aqueuse est
mesurée à 695 nm contre blanc dans spectrophotomètre UV.
Une solution à blanc typique contenue 1 ml de solution de réactif
et le cas échéant le même volume de solvant utilisé
pour l'échantillon et on l'incube dans les mêmes conditions que
reste de l'échantillon. Pour les échantillons de composition
inconnue, la capacité antioxydant peut être exprimée en
équivalents d'á- tocophérol (NUR ALAM, 2013).
II.21- Test mesurant l'activité antioxydant au
moyen de caroténoïdes
II.21.1- Dosage
Il s'agit de déposer des extraits purs à tester
sur une plaque CCM de gel de silice GF254 en aluminium et
développées dans les systèmes de solvants
appropriés. Après séchage, gicler la plaque avec une
solution chloroformique à 0,5 mg/ml de B-carotène. La plaque CCM
est ensuite exposée sous une lampe UV à 254 nm jusqu'à
décoloration de la plaque. Les zones antioxydants apparaissent en jaune
sur fond blanc. Il faut faire particulièrement attention aux substances
déjà colorées en jaune, car elles peuvent donner de faux
positifs (CHEICK TRAORE, 2006).
II.22- Activité de piégeage de l'oxyde
nitrique II.22.1- Principe
L'activité de piégeage de l'oxyde nitrique peut
être mesurée par la réaction de GRIESS décrite par
GREEN et al (1982) (NUR ALAM et al., 2012).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.22.2- Dosage
Le mélange réactionnel contenant 4 ml de
nitropruside de sodium à 10 mM, de 1 ml d'une solution saline du tampon
phosphate (pH 7,4) et 1 ml de l'extrait à (0.1875-3mg/ml), l'acide
ascorbique ou le BHT ont été incubées à 25
o C pendant 150 min. Après incubation, 0,5 ml de
réactif de GRIESS (1% de sulfanilamide, 2% Ophosphoric et 0,1% d'acide
NEDD) a été ajoutée en 0,5 ml de mélange
réactionnel. Le mélange est incubé à l'abri de la
lumière pendant 30 minutes. L'absorbance est mesuré à 535
nm contre le blanc (BUMRELA et NAIK, 2011).
Le pourcentage d'inhibition est calculé par la formule
suivant:
I(%) = [A1-A2/A2] x 100
A1 : absorbance sans extrait.
A2 : absorbance avec de l'extrait (BUMRELA et NAIK, 2011).
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CONCLUSION
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