II.16- Capacité antioxydant totale (TAC)
II.16.1- Principe
La capacité antioxydant totale (TAC) des extraits des
plantes est évaluée par la méthode de
Phosphomolybdène. Cette technique est basée sur
la réduction de molybdène Mo (VI) présent sous la forme
d'ions molybdate MoO42- à molybdène Mo (V)
MoO2+ en présence de l'extrait pour former
un complexe vert de phosphate/ Mo(V) à pH acide (PRIETO et
al.,1999).
II.16.2- Dosage
Un volume de 0.3 ml de chaque extrait méthanolique est
mélangé avec 3 ml de solution du réactif (0.6 M acide
sulfurique, 28 mM de phosphate de sodium et 4 mM de molybdate d'ammonium). Les
tubes sont vissés et incubés à 95C°
pendant 90 min. Après refroidissement, l'absorbance des solutions est
mesurée à 695 nm contre le blanc qui contient 3 ml de la solution
du réactif et 0.3 ml du méthanol et il est incubé dans les
mêmes conditions que l'échantillon. La capacité antioxydant
totale est exprimée en milligramme équivalents d'acide ascorbique
par gramme de la matière sèche (mg EAA/ g MS) (PRIETO et al.,
1999).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
II.17- Procédé de puissance de
réduction (RP)
II.17.1- Principe
Cette méthode est basée sur le principe
d'augmentation de l'absorbance des mélanges réactionnels.
L'augmentation de l'absorbance indique une augmentation de l'activité
antioxydant. Dans ce procédé, l'antioxydant forme un complexe
coloré avec ferricyanure de potassium, l'acide acétique et le
chlorure ferrique trichloro, l'absorbance du complexe est mesurée
à 700 nm. L'augmentation de l'absorbance de mélange
réactionnel indique le pouvoir réducteur des échantillons
(JAYAPRAKASH et al., 2001).
II.17.2- Dosage
Dans la méthode décrite par OYAIZU (1986), 2,5
ml du tampon phosphate de 0,2 M (pH 6,6) et 2,5 ml de K3Fe (CN)6 (1 %
massa/volume) sont ajoutés à 1,0 ml d'échantillon dissous
dans de l'eau distillée. Le mélange résultant est incube
à 50C° pendant 20 min, suivi par l'addition de 2,5 ml
d'acide acétique trichloro (10 % massa/volume). Le mélange est
centrifugé à 3000 rpm pendant 10 minutes. La couche
supérieure de la solution (2,5 ml) est mélangée avec l'eau
distillée (2,5 ml) et 0,5 ml de FeCl3 (0,1 % massa/volume). L'absorbance
est alors mesurée à 700 nm contre le blanc (NUR ALAM et al.,
2012).
II.18- Piégeage du radical hydroxyle
Le radical hydroxyle (OH°) est un radical
libre extrêmement réactif formé dans les systèmes
biologiques à partir d'anion superoxyde et le peroxyde
d'hydrogène en présence des ions métalliques comme le fer
et le cuivre suivant la réaction de HABER WEISS (CASTRO et FREEMAN,
2001). Ce radical possède un électron libre avec un potentiel de
réduction plus élevé (2310 mV) lui permet de réagir
avec les lipides, les protéines les polypeptides et l'ADN
particulièrement la thiamine et la guanine (SIDDHURAJU et BECKER,
2007).
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Chapitre II- Méthode d'étude d'activité des
antioxydants des plantes médicinales
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