Evaluation de l'activité antidermatophytique des extraits au méthanol et fractions d'acalyphamanniana (euphorbiacées) et tristemma hirtum (mélastomatacées)

II.4 Evaluation de l'activité antidermatophytique in vivo de la fraction résiduelle de Tristemma hirtum

L'évaluation de l'activité antidermatophytique in vivo a été effectuée en plusieurs étapes suivant les méthodes décrites par Iwata et al.(1989) et Cavalcanti et al.(2002).

II.4.1Préparation de l'inoculum et conditionnement des animaux

a) Préparation de l'inoculum

Dans un premier temps, une suspension de spores a été préparée en ajoutant 5 ml d'eau physiologique dans une boîte de Pétri de 55 mm de diamètre contenant une culture de T. mentagrophytes âgée de trois semaines. La surface de cette culture a été brossée très doucement. La suspension obtenue a été filtrée à l'aide d'un papier filtre qui retient les fragments de mycélium et laisse passer les spores. Des dilutions successives ont permis d'ajuster le nombre de spores à environ 10⁶ UFC/ml. L'inoculum ainsi préparé a été utilisé pour l'infection des animaux.

b) Conditionnement des animaux

Une aire de 4×4 cm du dos de chaque cochon d'Inde a été rasée à l'aide d'une lame, puis une zone de 2 cm de diamètre à l'intérieur de cette aire a été frottée avec du papier vert n° 120 tout en évitant de blesser l'animal.

II.4.2 Infection des animaux

Cinq cents ul d'inoculum (10⁵ spores) préalablement préparé ont été déposés sur la zone frottée. Cette zone a ensuite été recouverte d'une compresse maintenue en place à l'aide d'un ruban adhésif pour une durée de 24 h. Trois jours après inoculation, des observations microscopiques et des cultures des prélèvements sur milieu SDA, ont permi de savoir si l'infection était établie.

II.4.3 Formulation de la pommade et traitement des animaux

Trente grammes de beurre de karité ont été introduits dans un mortier, puis chauffés au bain marie (100°C) jusqu'à dissolution complète (5 min environ). 15 ml d'eau distillée et 0,25 g de sulfure y ont été ajoutés, et le mélange a été agité jusqu'à homogénéisation totale. 7,5 g de cire d'abeille ont ensuite été ajoutés, et le tout a été porté au bain marie (100°C) pour une solubilisation totale. Deux concentrations de la fraction dans la pommade ont été obtenues comme indiqué dans le tableau ci-dessous.

Tableau 2: Formulation de la pommade

Masse (en gramme) des ingrédients pour 10g de pommade(p/p) %pommade

Véhicule Extrait

9,5 0,5 5%

9,75 0,25 2 ,5%

Véhicule :beurre de karité+sulfure+cire d'abeille

Les aspects physiques des pommades obtenues sont illustrés par la photographie5