2.3 Analyses statistiques
Les comparaisons appariées entre les pattes
contrôles et les pattes blessées ont été
testées par le test de rang de Wilcoxon et quand le nombre de souris
était inférieur à 4, nous avons utilisé le test
exact de permutation. L'effet du traitement (GW0742 vs DMSO) a
été évalué en utilisant le test de Mann et Whitney.
La cinétique de régénération a été
testée grâce au test de Kruskal Wallis en considérant les 3
groupes (J4, J7 et J14). Les différences sont considérées
comme significatives pour une valeur de p < 0.05. Les résultats sont
présentés sous forme de moyenne #177; écart type. Les
données sont analysées
12
avec le logiciel Statview (version 4.57) et le logiciel
StatXact (version 8) pour le test exact de permutation.
3. Résultats
Dans un premier temps, nous avons vérifié que
l'agoniste de PPARâ (le GW0742) administré dans la nourriture des
souris conduisait bien à une activation de la voie PPARâ. La
quantité d'ARNm du gène PDK4 (gène cible de PPARâ
dans le muscle), est significativement plus élevée (2,5 fois)
dans le TLA des souris traitées au GW0742 pendant 15 jours, que dans le
TLA des souris contrôles (Figure 2), confirmant que la voie PPARâ
est plus active dans le TLA de souris traitées au GW0742. En revanche,
nous n'avons pas observé de variation significative de masse corporelle
des souris en réponse au traitement.
ARNm PDK4
|
4
|
|
|
|
|
|
|
|
U.A expression de PDK4
|
|
|
|
|
|
|
|
3
2
|
|
|
|
|
*
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
1
0
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
DMSO GW
Figure 2 : Quantité
d'ARNm de PDK4 dans les TLA de souris traitées ou non au GW0742. * :
p< 0.05 Différent de DMSO.
Indépendamment de la blessure, et afin d'établir
une valeur basale de référence, nous avons évalué
si l'apport de GW0742 impactait sur l'expression des gènes
utilisés dans la caractérisation des différentes
étapes du processus de régénération. La
quantité d'ARNm de Pax7 est significativement plus basse dans le TLA des
souris traitées avec du GW0742. Aucune différence significative
n'est montrée pour les autres gènes (Tableau 3).
Tableau 3 : Rôle des gènes
impliqués dans la régénération musculaire et
quantité d'ARNm dans les TLA de souris non blessées,
traitées au GW0742 ou avec un véhicule (DMSO). Les valeurs
présentées sont des moyennes +/- écart-type.
|
[ARNm]
|
Marqueurs des
|
Traitement
DMSO. n=6
|
Traitement
GW0742. n=6
|
|
Pax7
|
Cellules satellites quiescentes, actives
|
0,77
|
#177; 0,21
|
0,47
|
#177; 0,23
|
*
|
|
Myf5
|
Cellules satellites activées, destinées à
proliférer
|
1,00
|
#177; 0,43
|
0,54
|
#177; 0,32
|
|
|
MyoD
|
Myoblastes proliférés destinées à se
différencier
|
1,19
|
#177; 0,42
|
0,77
|
#177; 0,56
|
|
|
CD34
|
Cellules souches hématopoïétiques
|
1,36
|
#177; 1,06
|
0,38
|
#177; 0,08
|
|
|
Myogénine
|
Myocytes en train de se différencier
|
1,07
|
#177; 0,67
|
0,91
|
#177; 0,77
|
|
|
MRF4
|
Myocytes en train de fusionner
|
0,93
|
#177; 0,11
|
0,92
|
#177; 0,13
|
|
13
|
Myostatine
|
Maintient cellules satellites quiescentes
|
0,29 #177; 0,12
|
0,20 #177; 0,04
|
|
CD68
|
Monocytes
|
1,41 #177; 0,47
|
1,06 #177; 0,17
|
|
PPARâ
|
Facteur de transcription impliqué dans l'inflammation, le
métabolisme et la prolifération
|
0,84 #177; 0,29
|
0,91 #177; 0,77
|
* : p < 0.05 versus DMSO
La blessure induite par la CTX dans le TLA des souris a
conduit à une différence de masse corporelle plus
élevée chez les souris traitées au GW0742 qui tend
à être négativement plus élevée que celle des
souris contrôles (p= 0.06) (Tableau 4), ceci à tous les temps. De
même, nous observons une tendance (p=0.06) à ce que la variation
de masse des TLA (comparativement à la masse des TLA non blessés)
soit plus élevée, quel que soit le temps de sacrifice
post-blessure, chez les souris traitées au GW0742, comparativement aux
souris contrôles (Tableau 4). Néanmoins, toutes les souris ont
récupéré leur masse de TLA initial au jour 14
post-blessure.
Tableau 4 : Effet du GW0742 sur la variation de masse
des TLA blessés versus contrôles et sur la variation de masse
corporelle des souris, entre le jour de la blessure et les temps de
sacrifice.
|
Variation poids souris (g)
|
Variation masse TLA blessés versus contrôles (mg)
|
|
DMSO
|
GW0742
|
DMSO
|
GW0742
|
|
Jour blessure à J4 post blessure
|
0,05 #177; 0,30
|
-1,08 #177; 2,05
|
-8,61 #177; 1,38 *
|
-13,2 #177; 2,01 *
|
|
Jour blessure à J7 post blessure
|
0,06 #177; 2,43
|
-0,62 #177; 2,36
|
-6,9 #177; -2,59 *
|
-6,36 #177; 3,58 *
|
|
Jour blessure à J14 post blessure
|
1,36 #177; 0,68
|
-0,28 #177; 1,65
|
7,14 #177; 2,63
|
1,31 #177; 5,27
|
* : p< 0.0005 versus 0. Test univarié non
paramétrique.
Il y a une diminution significative des performances
d'endurance chez les souris traitées au GW0742, après la
blessure. En revanche, le traitement au GW0742 n'a pas conduit à de
différence significative sur les performances de force (Tableau 5). Il
est à noter que le traitement n'a pas conduit à de diminution
significative des capacités physiques avant la blessure.
Tableau 5 : Variation des performances d'endurance et
de force des souris DMSO et GW0742.
|
Temps limite sur tapis (min)
|
Grip test (N/g)
|
|
Jours sacrifice
|
DMSO
|
GW0742
|
DMSO
|
GW0742
|
|
J7
|
-13,94 #177; 14,69
|
-7,5 #177; 8,54 *
|
-0,005 #177; 0,007
|
0,00 #177; 0,006
|
|
J14
|
-18,04 #177; 22,15
|
-20,35 #177; 13,92 *
|
-0,004 #177; 0,003
|
0,00 #177; 0,006
|
* : p=0.0005 versus 0. Test univarié non
paramétrique.
D
U.A expression de MyoD
U.A expression de Pax7
Contrôle DMSO
C) ARNm MyoD Blessée DMSO
Contrôle GW Blessée GW
Contrôle DMSO
A) ARNm Pax7 Blessée DMSO
Contrôle GW Blessée GW
2,5
2,0
3,5
3,0
0,5
0,0
4
2
1,5
1,0
5
3
0
1
DMSO GW DMSO GW DMSO GW
DMSO GW DMSO GW DMSO GW
J4 J7 J14
J4 J7 J14
#
#
#
Contrôle DMSO
B) ARNm Myf5 * Blessée DMSO
Contrôle GW Blessée GW
5
U.A expression de Myf5
4
2
5
3
0
1
DMSO GW DMSO GW DMSO GW
J4 J7 J14
#
#
Figure 3 : Quantités
d'ARNm dans les TLA des marqueurs exprimés dans les cellules satellites
lors de l'état quiescent, activé et de prolifération,
selon les conditions de
14
|
|
