Memoire Online - Effets de l?activation de la voie du peroxisome proliferator-activated receptor beta (pparβ) dans le processus de régénération musculaire

Quel que soit le traitement administré, la quantité de Myostatine (Figure 5-A) est plus faible dans les pattes blessées que dans les pattes contrôles, ceci à tous les temps

post-blessure. Dans les pattes blessées, son expression est toutefois significativement plus faible 4 jours post-blessure comparativement aux autres jours. Les quantités d'ARNm de PPARâ (Figure 5-B) et de PDK4 (un gène cible-de PPARâ) (Figure 5-C) sont plus basses au jour 4 dans les pattes blessées comparativement aux pattes contrôles. Cette différence n'est pas observée aux jours 7 et 14. La quantité de PPARâ et de PDK4 revient à des valeurs non différentes des pattes contrôles au jour 7.

Figure 5 : Quantité d'ARNm (A) de Myostatine, (B) de PPARâ et (C) de PDK4 selon les conditions de blessure et de traitement aux différents temps post-blessure. Les valeurs présentées sont des moyennes +/- écart-type. * : p < 0.05 Différence significative entre les pattes blessées DMSO et GW0742 ; # : p < 0.05 Différence significative entre pattes blessées et pattes contrôles ; § : p < 0.05 Différence significative entre le jour 4 et les autres jours ; Trait orange : Niveau d'expression de base chez des souris non blessées traitées au DMSO.

3.1.2 Effet de la blessure sur la réponse immunitaire (macrophages, lymphocyte T)

totaux dans les pattes blessées, à tous les temps. Le nombre de macrophages M1

(macrophages pro-inflammatoires) est significativement plus élevé dans les pattes blessées par rapport aux pattes contrôles (à tous les temps) alors que le nombre de M2 (macrophages anti-inflammatoires) n'est significativement plus élevé comparativement aux pattes contrôles qu'au jour 4 post-blessure (Figure 6-A) et au jour 7 pour les souris DMSO. L'expression de CD68, un marqueur de surface des macrophages (totaux) dans le TLA des souris est significativement (50 fois) plus élevé au jour 4 dans les pattes blessées, confortant la réponse immunitaire induite par la blessure observée par l'analyse par cytométrie de flux (Figure 6-B).

Figure 6 : Nombre de macrophages totaux et sous populations M1 et M2 pour 10mg de TLA et quantité d'ARNm de CD68, un marqueur des macrophages, selon les conditions de blessure et de traitement aux différents temps post-blessure. Les valeurs présentées sont des moyennes +/- écart-moyen (macrophages) ou écart-type (CD68). * : p < 0.05

Différence significative entre les pattes blessées DMSO et GW0742 ; # : p < 0.05 Différence significative entre pattes blessées et pattes contrôles ; § : p < 0.05 Différence significative entre le jour 4 et les autres jours ; Trait orange : Niveau d'expression de base chez des souris non blessées traitées au DMSO

Le nombre de lymphocytes T (Figure 7) est significativement plus élevé 4 jours post-blessure, dans les pattes blessées des souris DMSO par rapport aux pattes contrôles. A partir du 7^ème jour, le nombre de lymphocytes est fortement diminué. A 4 jours post-blesure, les pattes blessées des souris DMSO sont infiltrées de CD4+ et de CD8+, puis ces populations ne sont plus représentées à partir du 7^ème jour (Tableau 6).

Figure 7 : Nombre de lymphocytes CD3, pour 10mg de TLA selon les conditions de blessure et de traitement aux différents temps post-blessure. Boites à moustaches résumant le maximum, les quartiles Q1, Q2 (médiane) et Q3 et le minimum. # : p < 0.05 Différence significative entre pattes blessées et pattes contrôles ; § : p < 0.05 Différence significative entre le jour 4 et les autres jours ; Trait orange : Niveau d'expression de base chez des souris non blessées traitées au DMSO

		Nombre CD4 pour 10mg TLA				Nombre CD8 pour 10mg TLA
Jours	Traitement	Contrôle		Blessée		Contrôle	Blessée
J4	DMSO	2,94 #177; 1,81 §		147,27 #177; 135,84	§ #	0,98 #177; 0,63	82,05 #177; 72,49	#
J4	GW	25,24 #177; 42,24	§	122,52 #177; 114,29	§ #	22,35 #177; 39,84	102,4 #177; 73,73	#
J7	DMSO	2,25 #177; 0,80		26,81 #177; 17,65 #		0,86 #177; 0,64	6,5 #177; 4
J7	GW	6,12 #177; 6,42		36,45 #177; 8,26 #		1,13 #177; 1,31	10,59 #177; 5,54
J14	DMSO	0,45 #177; 0,40		3,37 #177; 2,04		0,98 #177; 0,87	14,88 #177; 19,72
	GW	0,55 #177; 0,61		0,89 #177; 0,34		1,22 #177; 1,56	4,28 #177; 4,46

# : p < 0.05 Différence significative entre pattes blessées et pattes contrôles ; § : p < 0.05 Différence significative entre le jour 4 et les autres jours.

3.2 Effet du traitement GW0742 sur la cinétique de régénération du muscle
3.2.1 Effet du traitement GW0742 sur la cinétique des quantités d'ARNm des

La réponse musculaire à la blessure varie en fonction du traitement administré. Le

traitement GW0742 conduit à une récupération plus rapide du niveau d'expression basal observable de Myf5, CD34 et de Myogénine. En effet, les quantités d'ARNm de Myf5 (Figure 3-B), CD34 (Figure 4-A) et Myogénine (Figure 4-B) sont significativement plus basses dans les TLA blessés des souris GW0742 comparativement à celles des souris DMSO. La différence n'est plus significative après le jour 7 pour Myf5 (Figure 3-B), Myogénine (Figure 4-B) et CD34 (Figure 4- A). Les quantités d'ARNm de MRF4 sont significativement plus basses dans les TLA blessés des souris traitées au GW0742 comparativement aux TLA des souris DMSO (Figure 4-C). Cette différence n'est plus significative au jour 7. Le traitement au GW0742 a également conduit à des diminutions plus marquées, significatives au jour 4, des quantités d'ARNm de myostatine et de PPARâ en réponse à la blessure, comparativement à celles des souris traitées au DMSO (Figure 5-A, B). La quantité d'ARNm de PDK4 est, quant à elle, significativement plus élevée au jour 7 post-blessure chez les souris traitées au GW0742, dans les pattes blessées ainsi que dans les pattes contrôles comparées au souris DMSO (Figure 5-C). Nous n'avons pas observé d'effet significatif du traitement sur le nombre de cellules satellites (évalué au jour 9), que ce soit dans les pattes blessées ou dans les pattes contrôles (DMSO : 211 #177; 153 et GW : 129 #177; 57 cellules pour 10mg de TLA).

Effets de l?activation de la voie du peroxisome proliferator-activated receptor beta (pparβ) dans le processus de régénération musculaire

3.1.2 Effet de la blessure sur l'expression des gènes Myostatine et PPARâ

3.1.2 Effet de la blessure sur la réponse immunitaire (macrophages, lymphocyte T)