Conclusion
L'examen cytobactériologique d'un LCR doit être
fait avec rigueur.
L'examen microscopique qui doit être fait dans les plus
brefs delais, complété par la recherche des antigènes
solubles et surtout l'acheminement convenable du LCR ; permet au clinicien a la
fois de s'orienter vers un diagnostique correct en attendant les
résultats de la culture.
L'étude des cellules du LCR ne représente qu'un
domaine relativement limité de la cytologie pourtant cet examen est
indispensable dans l'établissement du diagnostic des
méningites.
Conduit a tenir devant un LCR
purulent
Annexe
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Les Colorations usuelles :
Coloration au bleu de méthylène
C'est une coloration simple (un seul colorant).
Réaliser un frottis : déposer sur une lame, une
goutte du culot de centrifugation, ou une goutte d'eau physiologique + une
colonie de la culture bactérienne (qui doit être bien
dilacérée dans l'eau
physiologique) ; puis a l'aide d'une anse de platine on
étale la goutte par des mouvements cylindriques de l'intérieur
vers l'extérieur (surface: 2cm/1cm).
Laisser sécher le frottis a l'air libre.
Fixer le frottis : par le méthanol (5min)
Ou par la chaleur (02 ou 03 légers passages sur la
flamme. Faire recouvrir la lame par le bleu de méthylène.
Laisser en contact pendant une minute.
Rincer (laver) abondamment a l'eau de robinet.
Egoutter, sécher, ajouter une goutte d'huile
d'émersion et observer au microscope optique au grossissement x
100.
Résultats:
Permet de repérer les bactéries,
d'apprécier leurs morphologies, leurs dispositions, leur
abondance.
Permet aussi de confirmer la nature des cellules
d'accompagnement.
Mais elle nécessite souvent d'être
complétée par une autre coloration comme la coloration de
gram.
Coloration de Gram:
C'est une coloration fondamentale en
bactériologie.
C'est une coloration différentielle (affinité
tinctoriale) basée sur la perméabilité des parois
bactériennes a l'alcool.
Réaliser et fixer le frottis de la même facon
que précédemment. Etapes de la coloration:
Etape de coloration:
Couvrir le frottis avec une solution de violet de gentiane
(cristal violet) et laisser agir une minute.
refeter l'excès de la coloration.
recouvrir la préparation de lugol (solution
iodo-iodurée) et laisser agir une minute.
refeter l'excès du lugol.
Etape de décoloration :
recouvrir a l'alcool pendant 30 secondes. Laver a l'eau
.
40
Etape de recoloration :
recouvrir avec la fuschine diluée pendant 30 secondes.
rejeter l'excès de la fuschine.
rincer abondamment, égoutter, sécher, examiner
a l'émersion. Résultats :
Certaines bactéries après avoir fixé le
violet ne sont pas décolorées par l'alcool, elles apparaissent
alors colorées en violet, on dit qu'elles sont a ((Gram positif
».
d'autres sont décolorées par l'alcool, elles ne
seraient pas visibles sans la coloration finale par la fuschine qui les teinte
en rose, on les dit a ((Gram négatif ».
ce cartactère est essentiel pour identification des
bactéries en catégories : bactéries a Gram +et
bactéries a Gram -
a) Coloration de May Grunwald Gièmsa (MGG):
. INTERET.
La method de may grunwald Gemsa (M.G.G) permet la coloration
des plaquettes, hématies et leucocytes afin d'établir le
pourcentage des différents, types .
. PRINCIPE.
Cette méthode es basée sur l'emploi successif
de deux colorants May Grunwald et Giemsa : le premier fixe le frottis par son
alcool éthylique et colore l'élément acidophile ainsi que
les granulations spécifique des leucocytes.
Second colore surtout les noyaux et les paroies aziophiles
.
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Conduit a tenir devant un LCR
purulent
· MATERIELS ET
REACTIFS
- Eprouvettes et portoirs ;
- Eau distillée et sèche lames;
- Solution de Giemsa (diluée au un
dixiémé (1/10) ).
· TECHNIQUE
- Poser la lame sur un support horizontal;
- Couvrir avec la solution de May Grunwald;
- Laisser agir trois minutes (3iin) ;
- Egoutter bien la lame;
- Recouvrir la frottis avec la solution de Giemsa (
duluée au 1/10e)
- Laisser agir pendant 20minutes (20mn) ;
- Rincer la lame avec de l'eau distillée (H2OD)
;
- Laisser le frottis sur le portoir sécher à
l'air ;
- Faire la lecture du frottis au microscope avec objectif
à
immersion.
· RESULTATS .
Les noyaux sont rouge - violet (basichromatine ) et rose
(Oxychromatine ) ;
Les cytoplasmes basophiles varient du bleu ciel au bleu
foncé
Les cytoplasme poly chromât ophiles sot
grisâtres avec des zones rosées et d'............ ;
Les granulations neutrophiles sont marron, rose
sole;
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Les granulations basophiles (éosinophiles) sont
orangées ;
Les granulations basophiles (métachromatique) sont
violet foncé ; Les granulations azurophiles sont pourpre ou violet
pourpre ; Les granulations basophiles des érythrocytes sont bleu
cobaltes.
Il faut savoir que ces couleurs peuvent être
altérées, soit par le vieillissement soit par la mauvaise
qualité des colorants, soit par l'emploi d'eau trop acide ; au trop
alcaline.
On ne voit pas par cette coloration, les mitochondries ni
les centrioles. Le centrosome est incolore, ce qui permet de le localiser
lorsque le cytoplasme est franchement coloré.
Conduit a tenir devant un LCR
purulent
Questionnaire
1/ pouvez-vous préciser la principale étape
dans le diagnostique de la méningite ?
L'examen macroscopique L'examen microscopique L'examen
après culture Autre
2/Est ce que la cytologie est suffisante pour rendre un
résultat de ECB de LCR?
Oui
Non
3/Quels sont les caractéristiques de la
démarche de l'examen de LCR? L'attention portée a l'acheminement
de LCR au laboratoire
Le délai de l'exécution de la
technique
L'aspect du prélèvement
Autres
4/Est ce que vous confinez les résultats de l'examen
cytologique avec les résultats de l'étude
bactériologique?
Oui
Non
5/quel est l'examen le plus fiable dans le diagnostique de la
méningite purulente?
L'examen cytologique
L'examen bactériologique
Autres
6/est ce qu'il est nécessaire toujours d'associer
l'étude biochimique et bactériologique?
Oui
Non
7/est ce qu'on peut parler d'une méningite a
méningocoque devant tout
les méningites purulentes?
Oui Non
8/quel est l'agent principal qui provoque l'aspect purulent?
Nombre des éléments (globules blancs polynucléaires). Type
de germe.
Autres.
9/Quel est la différence entre l'aspect purulent et
l'aspect trouble du LCR?
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La couleur. Le contenue. Autres.
Conduit a tenir devant un LCR
purulent
1O/quel sont les anomalies a éviter dans l'analyse de
LCR? Contaminations.
Manipulation.
Autres.
11/Est ce que l'aspect trouble du LCR indique toujours que
la méningite est bactérienne?
Oui
Non
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Conduit a tenir devant un LCR
purulent
Marenne 2008, ISBN: 978_
8041_5686_2.
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BEBLIOGRAPHIE:
· La Rousse Médicale
2003.
· Dictionnaire Médicale, Jaques
Quevauvillier 5éme édition, 2007
· Bacteriofiches, J_L. Fauchére,
edition marketing 1990, éditeur des préparations grandes,
école médecine 32, rue Bargue 75015 Paris
France.
· Cytologie du liquide céphalo-rachidien
Jaque Diebold 2004 ISBN: 2__84299_640_2, ISSN:1623_044 2.
· Maladies infectieuses ; Collection Med_line,
Xavier Aglaret et Emanuel Wortier édition 2001 2002.
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· Médecine interne(le guide de
l'interne), Gerd Herold,3eme édition, traduction de
l'édition Allemande par Fréderic Marenne et Anne
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