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àƒ??°valuation du diagnostic par PCR directe et PCR-élisa sur les ITS des trypanosomes pathogàƒÂ¨nes du bétail

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par Bachir SOULEY KOUATO
Université Cheikh Anta Diop de Dakar - Doctorat dà¢â‚¬â„¢état en médecine vétérinaire 2005
  

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Liste des Abréviations

ABTS® : [2-2'-Azino-bis-(3-ethyBenzaThiazoline-6-Sulfonic acid)]

ADN : Acide Désoxyribonucléique

ARN : Acide Ribonucléique

BCM: Buffy Coat Method

BET : Bromure d'Ethidium

BLAST : Basic Local Alignement Sequences Tools

BSA: Bovine Serum Albumine

CATT : Card Agglutination Trypanosomiasis Test

CIRDES : Centre International de Recherche-Développement sur l'Elevage en zone

Subhumide

CRTA : Centre de Recherches sur la Trypanosomose Animale

dATP : désoxy Adénine Triphosphate

dCTP : désoxy Cytosine Triphosphate

DEAE-cellulose: DiEthyl Amino-Ethyl-cellulose

dGTP : désoxy Guanine Triphosphate

Dig-dUTP : digoxigénine-11-2'-désoxyuridine

DMSO : Diméthylsulfoxyde

dNTP : désoxy Nucléotide Triphosphate

dTTP : désoxy Thymine Triphosphate

ELISA : Enzyme Liked Immuno Sorbent Assay

FAO : Food and Agriculture Organization

GVS : Glycoprotéines Variables de Surface

HCT: Hematocrit Centrifuge Technique

Ig G : Immunoglobuline G

Ig M : Immunoglobuline M

ILRAD : International Livestock Research for Animals Diseases

ITS : Internal Transcribed Spacer

OIE : Office International des Epizooties

OMS : Organisation Mondiale de la Santé

PATTEC : Pan African Tsetse and Trypanosomosis Eradication Campaign

PCR : Polymerase Chain Reaction

PLTA : Programme de Lutte contre la Trypanosomose Animale

PSG: Phosphate Sodium Glucose

SSu-rDNA : Small Subunit ribosomal DesoxyriboNucleic Acid

TAA : Trypanosomose Animale Africaine

Tb : Trypanosoma brucei

TBE : Tris Borate EDTA

Tcf : Trypanosoma congolense type forêt

Tcs : Trypanosoma congolense type savane

Tm : melting Temperature

Tv : Trypanosoma vivax

LISTE DES ANNEXES

Annexe 1 : Les souches de trypanosomes utilisées.

Annexe 2 : Amorces monospécifiques utilisées dans la PCR classique

Annexe 3 : Caractéristiques des amorces Tryp 4R et Tryp 4S

Annexe 4 : Caractéristiques des sondes retenues candidates pour le test

ELISA

Annexe 5 : Concentrations et volumes des réactifs pour la PCR classique

Annexe 6 : Concentrations et volumes des réactifs pour la PCR avec les

amorces Tryp 4R et Tryp 4S

Annexe 7 : Concentrations et volumes des réactifs pour la PCR-ELISA

Annexe 8 : Epreuve ELISA pour la révélation des produits d'amplification

LISTE DES FIGURES

Pages

Figure 1.1 : Schéma d'un trypanosome 6

Figure 1.2 : Différents stades morphologiques des Trypanosomatidae 6

Figure 2 : Ultrastructure des Trypanosomatidae 8

Figure 3 : Classification des principaux trypanosomes des mammifères 9

Figure 4 : Trypanosama congolense 11

Figure 5: Trypanosoma vivax 12

Figure 6: Trypanosoma brucei 13

Figure 7 : Cycle Biologique des trypanosoma brucei sp 16

Figure 8 : Aire de répartition des glossines en Afrique 20

Figure 9 : Structure de l'ADN 38

Figure 10 : Schéma de l'amplification par PCR nested de l'IST1 de l'ADN

Ribosomal 41

Figure 11 : Pièges et écrans pour la lutte contre les glossines 51

Figure 12 : Localisation du CIRDES matérialisé par son logo sur la carte du

Burkina Faso 54

Figure 13 : Schéma d'une unité de transcription de l'ADNr 57

Figure 14 : Schéma des ITS1des principaux trypanosomes pathogènes 58

Figure 15 : Les étapes de la PCR et cycle thermique 66

Figure 16 : Symboles utilisés pour expliquer le principe de la

PCR- ELISA 73

Figure 17 : Résultats obtenus avec les amorces monospécifiques 78

Figure 18 : Résultats obtenus avec les amorces Tryp 4R et Tryp 4S 81

Figure 19 : Cas d'infections à T.v et T.c.s détectées par les trois test de

diagnostic 81

Figure 20 : Résultats comparés PCR classique / PCR-ITS 87

Figure 21 : Révélation sur gel d'agarose des produits PCR des échantillons

d'ADN de référence 89

Figure 22 : Révélation par ELISA des produits PCR des échantillons

d'ADN de référence 89

Figure 23a : Photo d'un gel d'agarose 94

Figure 23b : Photo d'un gel d'agarose 94

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"Il y a des temps ou l'on doit dispenser son mépris qu'avec économie à cause du grand nombre de nécessiteux"   Chateaubriand