3.1 MATERIELS
· Moule
· Groupe Thermoélectrique (TGE)
· Microtome
· Bain Marie
· Lames et lamelles
· Etuve
3.2 PRODUITS
· Paraffine
· Xylène
· Papier Buvard
3.3 METHODE
3.3.1. ENROBAGE
L'enrobage est basé sur un appareil appelé «
Groupe Thermoélectrique »ou
(TGE). Il est constitué de trois parties :
· Première partie : elle
est caractérisée par une température très
élevée, elle contient de la paraffine sous forme liquide.
Au dessus on trouve de petits moules, et au dessous on trouve
les cassettes plongées dans la paraffine.
· Deuxième partie : elle a
aussi une température très élevée, et
possède en plus un robinet de paraffine.
· Troisième partie : par
contre, cette partie présente de très basses températures
comprises entre - 9°C et - 10°C.
Les moules qui contiennent les cassettes sont obligatoirement mis
au dessus pour refroidissement jusqu'à solidification.
> Cette technique consiste à plonger les cassettes dans
un bain de paraffine liquide contenu dans la première partie du TGE.
> On prend une cassette, qu'on ouvre et dans la quelle on met
les échantillons. Chaque échantillon est mis dans un moule qui a
la même taille ;
> Chaque moule est posé au dessous du robinet de
paraffine ;
> Puis, on met ce moule dans la troisième partie du TGE
afin d'obtenir un bloc de moule solide.
3.3.2. DECOUPAGE
> On insère la cassette paraffinée sur le
microtome ;
> On tourne les deux bras de l'appareil en sens inverse, pour
obtenir de fine couche de ce bloc paraffiné ;
> On choisit les couches les plus fines et les mois
plissées qu'on met dans un Bain Marie et cela pour bien les fixer ;
> On prépare des lames, et on étale doucement
les micros fragments dans celles-ci, toute en essuyant celles qui
débordent avec du papier buvard.
> On codifie les lames.
3.3.3. DEPARAFFINAGE
On met les lames dans l'étuve à une
température très élevée d'environ
250°C pour déparaffiner. Ensuite on les place dans
un portoir émergé dans le xylène pendant 1 à 2
minutes.
3.3.4. COLORATION
La coloration des échantillons s'effectue manuellement en
utilisant la coloration « Hématoxyline Eosine
». (Tableau 3)
Tableau 3 : Coloration « Hématoxyline
Eosine »
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NUMERO DU BAIN
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PRODUITS
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TEMPS
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1
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Toluène ou xylène
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2 minutes
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2
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Alcool 100°
|
2 minutes
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3
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Alcool 95°
|
2 minutes
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4
|
Alcool 75°
|
2 minutes
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5
|
Eau
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10 secondes
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6
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Hématoxyline Harris
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5 minutes
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7
|
Eau
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10 secondes
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8
|
Acide chlorhydrique
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8 secondes
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9
|
Carbonate de Lithium
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10 secondes
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10
|
Eau
|
10 secondes
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11
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Alcool 95°
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1 minute
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12
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Eosine
|
10 secondes
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13
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Alcool 100°
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2 minutes
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14
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Alcool 100°
|
2 minutes
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15
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Xylène ou toluène
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2 minutes
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NB : les lames ne doivent sortir du
xylène que pour le montage.
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