2.1.1. INTERET DIAGNOSTIQUE DU TEST
Une hépatite virale de type B est le plus souvent
accompagnée de l'apparition de l'antigène de surface du virus de
l'hépatite B dans le sérum. En règle
générale, l'AgHBs peut être mis en évidence dans le
sérum dès 2 à 3 semaines avant le début de la
maladie, et atteint son point culminant au moment de l'apparition des
symptômes caractéristiques (ictère, modification de
concentration des enzymes spécifiques du foie). On observe ensuite
généralement une lente élimination de l'antigène.
Chez un certain nombre de sujets, et chez un pourcentage inconnu de personne
ayant été infectées par le virus de façon
subclinique, l'antigène peut rester mesurable dans le sérum
pendant des années, voire à vie.
Dans la mesure où une transfusion de sang contenant le
l'AgHBs a entrainé une hépatite B dans de nombreux cas, le
principal intérêt de la mise en évidence de l'AgHBs
réside dans le dépistage des dons de sang, afin de réduire
la fréquence des hépatites B post-transfusionnelles. La
détection de l'AgHBs est également utilisée pour le
diagnostic des hépatites B aiguës et chroniques.
2.1.2. REACTIFS
· 2 plaques d'Enzygnost HBsAg 5.0 ;
· 2 x 6.5ml du conjugué 1 (Anti-HBs/Biotine) ;
· 2 x 15ml du conjugué 2 (stréptavidine/POD)
;
· 2 x 1.5ml de sérum de contrôle HBsAg positif
;
· 2 x 3 ml de sérum de contrôle HBsAg
négatif. 2.1.3. PRINCIPE
Le test immunnoenzymatique pour la détection de
l'antigène de surface du virus de l'hépatite B est basé
sur une réaction en deux étapes :
> L'AgHBs contenu dans l'échantillon à tester
réagit tout d'abord simultanément d'une part avec les anticorps
anti-HBs polyclonaux fixés à la surface des cupules de la plaque
de micrtitration ;
> D'autre part avec le Conjugué 1 (Anti-HBs/Biotine,
coloré en Bleu) ;
Après élimination des éléments non
liés, le conjugué 2 (stréptavidine/POD, coloré en
jaune) réagit avec le conjugué 1.
Après élimination des éléments non
liés, l'activité enzymatique du Conjugué 2 lié est
mesurée (réaction colorée en bleu). La transformation
enzymatique du chromogène est ensuite interrompue par l'addition de la
Solution d'arrêt POD réaction colorée en jaune).
L'intensité de la coloration est directement proportionnelle à la
concentration antigénique de l'échantillon.
NB : Les échantillons à tester doivent
être des sérums humains ou plasmas citratés,
héprinés ou prélevés sur EDTA, obtenus selon les
techniques standard des laboratoires. Les échantillons peuvent
être conservés 3 jours maximum à +2/+8°C. Pour une
conservation plus longue, les congeler.
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