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Partie expérimentale
I .3 Activité antifongique
I .3.1 Effet des huiles essentielles sur la croissance
mycélienne
L'effet antifongique des huiles essentielles sur les isolats
d'Alternaria, est évalué selon la méthode de
contact directe sur gélose décrite par Fandoham
(2004). Différentes concentrations en huile essentielles 0.8
uL/mL, 0.95 uL/mL , 1.1 uL/mL sont obtenues par addition de 12, 14.25 et 16.5
uL d'huile essentielle à 15 mL de milieu PDA en surfusion à
450C contenant Tween 20 (Sigma 0,5%, v/v). Le mélange (huile
essentielle+PDA+ Tween 20) est ensuite homogénéisé au
vortex puis coulée dans des boites de pétri de 90 mm de
diamètre.
Deux concentrations ont été utilisées
pour l'HE de M.debilis (0.95 uL/mL, 1.1 uL/mL).
Des disques mycéliens de 6 mm de diamètre
prélevés à partir de la périphérie des
colonies fongiques âgées de 10 jours, sont déposés
aseptiquement au centre des boites de pétri contenant le milieu PDA
additionné à différentes concentrations d'huile
essentielle avec trois répétitions pour chaque isolat et chaque
concentration. Les boites de pétri témoins contiennent 15 ml de
milieu PDA additionné au Tween 20 (sans huile essentielle). Les souches
testées sont ensuite incubées à 250C pendant 10
jours.
La mesure de la croissance mycélienne est
effectuée chaque jour à partir du 3éme jusqu'au
10éme jour d'incubation par mesure des deux diamètres
perpendiculaires des colonies.
La CMI (concentration minimale inhibitrice) est
déterminée après 10 jours d'incubation et correspond
à la plus faible concentration pour laquelle nous n'observons pas de
croissance fongique à l'oeil nu (Remmal et al., 1993,
Kumar et al., 2008).
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