Partie expérimentale
I.1.6.2 Etude microscopique
Cette étude se fait par l'observation des isolats au
microscope optique aux differents grossissement (Gx10 , Gx40, et par l'huile
à immersion à (Gx100). Ce type d'identification est fondé
essentiellement sur l'étude morphologique du mycelium (absence ou
presence de cloison, couleur ,...etc) et des spores ( forme, couleur, taille,
nombre de septa, formation des chaines de spores)
Les préparations microscopiques ont été
réalisées par deux méthodes :
A l'etat frais
La manipulation consiste à mettre un petit fragement
mycelien sur la lame propre placée entre deux becs bunsen en presence
d'une goutte de liquide de montage (lactopphenol, bleu de methylene), puis le
recouvrir délicatement d'une lamelle en évitant de créer
des bulles d'air des débordements.
Par microculture (culture sur lame ou méthode
de carré de gelose)
Cette technique consiste à ensemencer les spores des
moisissures sur des petits carrés de PDA (15mmx15mm) de 2 mm d'epaisseur
placés entre lames et lamelles. Les spores sont ensemencés sur
les limites périphériques du milieu pour fournir un potentiel
d'oxygène élevé afin qu'elles puissent germer. L'ensemble
est conditionné dans une chambre humidifiées, et après 3
jours d'incubation à 25#177;2°C, les lamelles aux quelles
s'adhèrent le mycélium sont transférées sur d'autre
lames stériles contenant quelques gouttes de lactophenol pour
l'observation microscopique aux grossissements x10, x40 et x100.
Les observations sont comparées aux clés
d'identification propre à chaque espèce (Simmons,
2007)
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Figure 18 : Photos représentant la
méthode de microculture
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