Chapitre 2.
Matériels et méthodes
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Matériel et méthodes
Dans ce chapitre, nous présenterons les protocoles
expérimentaux préconisés pour l'extraction et l'analyse de
la composition chimique des huiles essentielles et des extraits ainsi que les
techniques utilisées pour le dosage de l'activité
antioxydante.
I. Matériel végétal
Des prospections effectuées, en Tunisie, durant les
mois de Novembre 2014, nous ont permis de repérer huit populations de
Foeniculum vulgare Mill., représentatives de l'aire de
répartition de l'espèce qui s'étend de l'étage
bioclimatique humide (Mjeles),sub-humide (EL Alia,Oued zarga,
Téboursouk), au semi-aride (Kélibia, Zouarine, Zaghouan, Cebalet
ben ammar). Nous avons tenu compte dans notre échantillonnage de
l'éloignement géographique des populations et du bioclimat. La
localisation géographique des populations est rapportée dans la
figure 11.
Dix individus de chaque population ont été
collectés. Les plantes ont été séchées
à l'air libre et à l'ombre pendant une semaine et les graines ont
été isolées du reste de la plante pour servir à
l'extraction.
Figure 11: Les différents sites de
collecte de Foeniculum vulgare MILL.
II. Préparation des extraits
1. Préparation des extraits aqueux
L'extraction a été effectuée selon la
méthode de Mau et al. (2001).Elle est réalisée en
ajoutant 10 g de poudre végétale à 100 ml d'eau
distillée. Après une macération de 24 heures, le
mélange est filtré sur du papier filtre (papier watman
N°4).Les extraits ont été évaporés sous vide
grâce à un évaporateur rotatif. Le résidu sec est
pesé puis repris dans l'eau distillée, de façon à
obtenir une concentration de 1 mg/ml. Les extraits ainsi obtenus sont
conservés à 4°C et à l'abri de la lumière pour
être utilisés pour les différentes analyses.
2. Extraction des huiles essentielles
L'extraction des huiles essentielles a été
effectuée par hydrodistillation à l'aide d'un appareil de type
Clevenger (figure12).
100 g de graines séchées ont été
broyés. La poudre obtenue est soumise à une hydrodistillation
dans un dispositif de type clevenger pendant trois heures. Les vapeurs
chargées d'huiles en traversant un réfrigérant se
condensent. L'eau et l'huile se séparent par différence de
densité. Les huiles essentielles obtenues sont conservées
à -4°C.
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Figure 12: Hydrodistillation par système
clevenger
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Le rendement des huiles essentielles s'exprime par le rapport
entre la quantité d'huile extraite et la quantité de
matière végétale utilisée pour l'extraction. Il est
calculé de la manière suivante : R (%) =
(MHE/MMV)*100
Avec : MHE : masse de l'huile essentielle obtenue
MMV : masse de la matière végétale
utilisée
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