III-2 Effet de la température sur la
réaction de bioconversion et sur l'activité â-
glucosidase
Les différents essais d'activité 3-glucosidase
et des réactions de bioconversion des margines ont été
effectués dans des lots séparés contrôlés aux
différentes conditions de température. On montre l'effet de ce
paramètre sur l'activité 3-glucosidase et sur la production de
l'hydroxytyrosol par l'hydrolyse enzymatique des margines par la
préparation d'enzyme enrichie en 3-glucosidase dans la Fig. 30. La
température de réaction varie de 25 à 100 °C. Les
contrôles ont été également réalisés
par addition de l'eau au lieu de la préparation enzymatique. La Fig. 30
montre que la température n'a pas d'effet sur la libération
117
Résultats et Discussion
d'hydroxytyrosol. Toutefois, l'ajout de la préparation
enzymatique montre une augmentation de la concentration de l'hydroxytyrosol en
toute la gamme de température. Les résultats montrent que
l'activité 3-glucosidase a augmenté progressivement avec
l'augmentation de la température de 25 à 50 °C. Cependant,
l'activité 3-glucosidase était significativement plus importante
dans des températures s'étendant entre 50 et 70 °C que cela
aux limites de 25 à 40 °C. Comme c'est montré dans la Fig.
30, la préparation d'enzyme brute a montré que l'activité
catalytique est plus élevée à 50 °C. Elle a
été complètement inactivée à une incubation
de température de 100 °C (Fig. 30).
Figure 30: Effet de la température sur
l'activité 3-glucosidase et la production de l'hydroxytyrosol. Les
barres d'erreur indiquent l'écart type (n = 2).
La température optimale de notre enzyme est semblable
à la majorité de 3-glucosidases bactériennes et fongiques
annoncée précédent (Gueguen et al., 1994 ; Wei
et al. , 1996 ; Sharmila et al. , 1998 ; Saha & Bothast.,
1996 ; Yan et al., 1998), et bien sure inférieure que certaines
3-glucosidases thermostables (Hang & Woodams, 1994 ; Saha et al., 1994).
Cependant, la tolérance de chaleur de notre 3-glucosidase est plus haute
que les expériences de 3-glucosidases les plus annoncées
(Barbagallo, 2004).
III-3 Effet du pH sur la réaction de bioconversion
et sur l'activité â- glucosidase
Le pH optimum pour l'activité 3-glucosidase a
été déterminé sur une gamme de pH allant de 2
à 8. La même étude a été exploitée
pour la bioconversion des composés phénoliques des margines, en
présence de la préparation enzymatique enrichie en 3-glucosidase.
Les contrôles ont été également
réalisés par addition d'eau au lieu de préparation
enzymatique. Les effets du pH sur l'activité 3-glucosidase et sur le
rendement de
118
Résultats et Discussion
bioconversion ont été représentés
dans la Fig. 31. La Fig. 31 montre que le pH n'a pas d'effet sur la
libération d'hydroxytyrosol. Toutefois, l'ajout de la préparation
enzymatique montre une augmentation de la concentration de l'hydroxytyrosol
dans toute la gamme de pH. Les résultats indiquent que la 3-glucosidase
a montré une activité maximale à pH 4,8. Il a
été totalement inactif à un pH au-dessus de 6 et moins de
3. L'activité 3-glucosidase a été comparativement plus
élevée dans la gamme acide que dans le domaine alcalin.
Remarquablement, la 3-glucosidase d'A. Niger a montré un pH
optimal relativement élevé que la plupart des 3-glucosidases
d'autres champignons et de bactéries (Zheng & Shetty, 2000). Ce pH
optimum de réaction de bioconversion de 4,8 coïncide très
bien avec le pH naturel des margines qui varie entre 4,6 et 5.
Figure 31 : Effet du pH sur l'activité
3-glucosidase de jus de culture d'A. niger et sur la production de
l'hydroxytyrosol. Les barres d'erreur indiquent l'écart type (n = 2).
L'effet du pH démontre aussi une corrélation
positive entre la libération de l'hydroxytyrosol et l'activité
3-glucosidase. La réaction de bioconversion à pH 4,8 donne la
plus forte concentration d'hydroxytyrosol (1,54 g/l), qui est le
résultat de la plus haute activité 3-glucosidase
enregistrée dans ces expériences.
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