II-11 Détermination de la concentration des
ortho-diphénols totaux
La détermination de la concentration des phénols
totaux revient à doser l'acide gallique équivalent (Bouaziz et
al., 2005). 1 ml de l'échantillon dilué est
transféré dans le tube à essai avec 1 ml d'éthanol
à 95 %, 5 ml d'eau distillé et 0,5 ml de réactif de folin
«Folin-Ciocalteu phénol» sont ensuite ajoutés.
Après un temps d'incubation de 5 minutes, 1 ml de la solution Na2CO3
à 5 % est ajouté, bien homogénéisé et
gardé à l'obscurité pendant une heure. Après,
l'échantillon est vortexé et l'absorbance est mesuré
à 725 nm utilisant le spectrophotomètre. La courbe
d'étalonnage est réalisée avec l'acide gallique.
II-12 Analyse par GC-MS
L'échantillon de margine (20 ml) sont extrait avec
l'acétate d'éthyle (60 ml). La phase organique est
collecté et réduit à un volume de 10 ml par
l'évaporation au rotavapeur (37 °C) et par la suite silylé.
Pour la procédure de silylation, on prépare un mélange de
pyridine (40 ul) et BSTFA (200 ul) et 20 ul d'extrait de margine qui est
mélangé et vortexé dans les tubes en verre qui sont
placés dans un bain marie à 80 °C pendant 45 minutes. A
partir de la solution silylé 1 ul est directement analysé par
GC-MS.
II-13 Détermination de la matière
sèche (MS)
La matière sèche (MS) représente
l'ensemble des substances organiques et inorganiques en solution ou en
suspension, contenues dans l'échantillon. Cette matière est
déterminée à 105°C par l'évaporation d'un
échantillon de masse m1, dans un creuset en porcelaine de masse initiale
m0, jusqu'à obtention d'une masse constante m2
(généralement après 24 h).
MS g/l = 1000 (m2-m0)/(m1-m0)
II-14 Dosage de glucose (méthode enzymatique
GOD-PAP)
Le dosage enzymatique du glucose est effectué en
présence des enzymes « glucose oxydase et peroxydase ».
D'abord, le glucose est oxydé en acide gluconique avec libération
de peroxyde d'hydrogène. Ce dernier réagit avec le phénol
et le 4-amino-antipyrine et sous l'action de la peroxydase il donne une
quinone-imine de couleur rosâtre. Trois échantillons sont
préparés: le blanc (2,5 ml des enzymes + 20 ul d'eau
bi-distillée), le standard (20 ìl standard + 2,5 ml des enzymes)
et l'échantillon de margine (20ìl échantillon +2,5 ml des
enzymes). Après incubation des échantillons à 37 °C
pendant 15 min, la mesure de la densité
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Matériel et Méthodes
optique des échantillons est effectuée à
505 nm contre le blanc de réactif. Le calcul de la concentration du
glucose est égal alors :
Glucose g/l = DO échantillon/DO standard * Dilution
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