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Bioconversion enzymatique des composés phénoliques des effluents issus de l'extraction d'huile d'olive: une voie prometteuse de valorisation par la production de l'hydroxytyrosol naturel

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par Manel HAMZA KARRAY
Université de Sfax école nationale d'ingénieurs de Sfax - Doctorat en biologie 2013
  

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I-1 Appareillages

Le matériel de laboratoire utilisé au cours de notre étude consiste à :

- Autoclave Lequeux, France.

- Etuves MEMMERT GmbH+Co.KG Postfach, Allemagne.

- Hotte à flux laminaire FLUFRANCE, France.

- Microscope optique RME 5, Allemagne.

- Shaker CERTOMAT® R, Braun Biotech International, Allemagne.

- Spectrophotomètre Shimadzu UV160U, Japan.

- Vortex Retsch (modèle MM 2000), Allemagne.

- Broyeur homogénéisateur : Ultra Turrax T25 basic, IKA, Allemagne.

- Dispositif de filtration Millipore, filtre GF/D, France.

- pH-Meter (Metrohm) 691, Suisse.

- Rotavapeur «R110 Biichi»

- Système chromatographie liquide à haute performance couplée à la spectrométrie

ultraviolet (CHPL-UV) de type «Waters».

- Système chromatographie liquide à haute performance couplée à la spectrométrie de

masse (CHPL-SM) de type «Waters».

- Système chromatographie gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CPG-SM) de

type «Hewlett-Packard model 5872 A».

I-2 Produits chimiques

Les produits utilisés au cours de cette étude sont de pureté garantie et procurés chez des fournisseurs agréés. Les fournisseurs et les produits sont :

Hydroxytyrosol, utilisé comme un standard, est purifiée à partir des margines dans notre laboratoire (Allouche et al., 2004 a). p-nitrophenol (PNP), p-nitrophenyl-3-D-glucopyranoside (PNPG), p-nitrophenyl acétate (PNPA), butylated hydroxytoluéne (BHT) and 2,6-diméthoxyphénol (DMP) est acquise de Sigma-Aldrich. La 3-glucosidase purifiée à partir d'Aspergillus niger (EC 2328898) est acheté aussi de Sigma-Aldrich. L'acétate d'éthyle, l'acétonitrile, et l'acide orthophosphorique sont des solvants à grade HPLC et acheté à partir de Prolabo (France). Le réactif de folin « Folin-Ciocalteu phenol » est procuré de Sigma-Aldrich Chemie (Switzerland). Le xylane de Sigma, hydroxyethylcellulose (Fluka 54290).

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Matériel et Méthodes

Finalement, 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl (DPPH) et alginate (poudre) sont procurés de Fluka (Switzerland).

I-3 Substrats biologiques

I-3-1 Margine

Les margines utilisées proviennent du système d'extraction en discontinu «super presse» : MSP et du système d'extraction continu «chaîne continue» MCC, depuis la campagne de 2006-2007 jusqu'à celle de 2009-2010 de la région de Sfax. Les margines sont collectées dans des bouteilles et stockées dans le congélateur afin qu'elles gardent leurs caractéristiques biologiques et physico-chimiques initiales.

I-3-2 Son de blé

Le son de blé utilisé est procuré à partir de la Société Tunisienne de Produit Animale « STPA ». Un lot de dizaine de kilogrammes a été acheté et stocké dans la chambre froide à + 4 °C.

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"Soit réservé sans ostentation pour éviter de t'attirer l'incompréhension haineuse des ignorants"   Pythagore