Chapitre IV :
Identification de
compositions
chimiques des huiles
obtenues.
IV.IDENTIFICATION DE COMPOSTIONS CHIMIQUES DES HUILES
ESSENTIELLES DU CURCUMA LONGA ET MYRISTICA FRAGRANS:
IV.1.Présentation des méthodes
chromatographiques utilisés :
1. Chromatographie gazeuse:(GC)
La chromatographie gazeuse GC est une méthode de
séparation mais aussi d'analyse. En effet, les temps de rétention
peuvent donner une information sur la nature des molécules et les aires
des pics fournissent une quantification relative.
L'identification d'une substance peut être
facilitée par la connaissance de son temps de rétention qui est
une valeur caractéristique pour une phase stationnaire donnée. En
effet, les temps de rétention de chaque composé dépendent
des conditions expérimentales (nature et épaisseur de la phase
stationnaire, programmation de la température, état de la
colonne, etc). Une meilleure information peut être obtenue grâce
à l'utilisation des indices de rétention, mesurés sur les
colonnes apolaire et polaire, qui sont plus fiables que les temps de
rétention. Ils sont calculés à partir d'une gamme
étalon d'alcanes ou plus rarement d'esters méthyliques
linéaires. Le calcul peut se faire pour une expérimentation
à température constante par interpolation logarithmique: indices
de Kováts (IK) (1965), ou en programmation de température par
interpolation linéaire indices de rétention ou indices de Van Den
Dool et Kratz (Ir) (1963).
Indices de Kováts :
tr(x) : temps de rétention du composé
étudié.
tr(z) : temps de rétention de l'alcane à (z) atomes
de carbone qui précède (x).
tr(z+n) : temps de rétention de l'alcane à (z+n)
atomes de carbone qui suit (x).
n : différence du nombre d'atome de carbone entre les deux
alcanes (généralement n=1)
Condition opératoires :
- Mode d'injection : splitless ;
- Température détectée : 220°C ;
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- Température d'injection : 300°C ;
- Volume injectée : 0,5ul ;
- Colonne utilisée : Cl-Sil 5CB ;
- Programmation du four :
[60°C/8min-4°C/min-250°C/20min] ;
- Débit gaz vecteur : 0,5ml/min.
2. Chromatographie gazeuse couplée à la
spectrométrie de masse: (GC/MS)
D'un point de vue analytique, d'important progrès ont
été réalisés en couplant la GC avec un
spectromètre de masse (SM).
Le couplage de la chromatographie en phase gazeuse à la
spectrométrie de masse GCMS est une technique d'analyse qui
possède plusieurs atouts : le chromatogramme en phase gazeuse permet de
séparer les constituants d'un mélange. Le spectromètre de
masse associé permet d'obtenir le spectre de masse de chacun des
constituants et bien souvent de les identifier. La chromatographie en phase
gazeuse et la spectrométrie de masse possèdent des limites de
sensibilité voisines. Leur association permet de disposer d'un outil
analytique très performant. L'identification de produits est
réalisable pour des quantités de l'ordre du nano gramme, la
détection par fragmentométrie est possible jusqu'au pictogramme.
Il réclame peu d'échantillon, la quantité injectée
est de l'ordre du microlitre. Il est rapide, le temps d'acquisition du spectre
est identique à celui de l'analyse chromatographique.
La même essence est injectée dans un chromatographe
couplé à un spectromètre de masse GC-MS de type HP6890,
à impact électronique avec une énergie d'ionisation de 70
eV. Les conditions opératoires de la colonne, d'injection et de
programmation de température étant identiques à celles de
la chromatographie gazeuse. Le débit du gaz vecteur (hélium) est
de 0.5 ml/mn. La température de l'interface du spectromètre de
masse est fixée à 280 °C, le temps du solvant delay est de 4
min. L'huile extraite est injectée en GC et GC-MS pour établir
une analyse qualitative et semi-quantitative. L'identification des constituants
a été effectuée par comparaison des indices de
rétention et des spectres de masse obtenus et avec ceux cités en
littérature et donnés par les banques de librairie spectrale
(Wiley7, Nist 2002).
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