4. Etude de l'activité antioxydante de la poudre de
tomate:
Ø Test du pouvoir anti oxydant par
Réduction du Fer (FRAP : ferric reducing antioxidant
power)
Principe
L'évaluation est basée sur la réaction de
réduction du (Fe+3) présent dans le complexe
ferrocyanure de potassium en (Fe+2), la réaction est
révélée par le virement de couleur jaune du fer ferrique
(Fe+3) en couleur bleu vert du fer ferreux (Fe+2),
l'intensité de cette coloration est mesuré par
spectrophotomètre à 700 nm.
Le protocole expérimental utilisé est celui de
Yildirim et al, 2001
Mode opératoire
Ø 0.5ml d'échantillon à
différentes Concentrations est mélangée avec 1.25ml d'une
solution tampon du phosphate 0.2M (PH 6.6) et 1.25ml d'une solution de
Ferricyannure de potassium K3Fe(CN)6 à 1% (1 g de
K3Fe(CN)6dans 100ml d'eau distillé).
Ø Incubation (bain marie) à 50°C pendant
20mn ensuite refroidissement.
Ø 2.5ml d'acide Trichloracétique à 10%
sont ajoutés pour stopper la réaction ensuite centrifugation
3000T/mn pendant 10mn
Ø 1.25ml du surnageant sont ajoutés à
1.25ml d'ED et 250ul d'une solution de chlorure ferrique à 0.1%
fraichement préparé.
Ø Lecture se fait contre un blanc à 700nm.
Le blanc : en remplaçant l'extrait par l'eau
distillée qui permet de calibrer l'Appareil.
Le contrôle positif est représenté par
l'acide ascorbique dont l'absorbance à été mesurer dans
les mêmes conditions que les échantillons
? Absorbance signifie une augmentation du pouvoir
réducteur des extraits.
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