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Contribution à l?étude phytochimique et biochimique

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par Sofiane MAZOUZI et BEKKAI
BADJI Mokhtar Annaba - Master 2010
  

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2.3.5.7. Dosage de TGP : selon la fiche technique spinréact

a-Principe :

Le principe est présenté selon la réaction suivante :

ALT

á-cétoglutarate + L- Alanine glytamate + pyruvate

LDH

Pyruvate + NADH+H+ L-laclate + NAD+

40

Résultats & Interprétation

La diminution de la concentration en NADH est directement proportionnelle à l`activité enzymatique d`alanine aminotransférase dans l`échantillon (39,40).

b-Echantillon : Plasma.

c-Réactif utilisés :

Réactifs

Composition

Concentration

R1

Tampon

-Tris pH 7.8 -L- Alanine

100 mmol/L 500 mmol/L

R2

Substrat

-NADH

-Lactate déhydrogenase (LDH)

-

0.18 mmol/L 1200 U/L

? Préparation du réactif :

Dissoudre le contenant du R2 dans le flacon de R1. Ce réactif est stable 2 semaines à 2-8°C. d-Mode opératoire :

Réactif de travail (ml)

1.0

Echantillon (ul)

100

Mélanger, incuber pendant une minute à température ambiante et lire l`absorbance initiale à 340 nm. Lire à nouveau après 1, 2 et 3 minutes. Déterminer la moyenne des absorbances par minutes (Ä Abs/min) pour l`utiliser dans les calculs.

e-Calcul :

La concentration de TGO est calculée par la formule suivante : Activité TGP (U/L) = ÄA/min X 1750

2.3.5.9. Dosage de FT4 :

a-Principe

Enzyme compétitive Immunoassay

Les réactifs essentiels exigés pour une enzyme de phase ferme immunoassay incluent l'anticorps immobilisé, l'enzyme-antigène conjugué et l`antigène natif.

Après le mélange de l'anticorps immobilisé, l'antigène-enzyme conjugué et un sérum contenant l'antigène natif, une réaction de compétition résulte entre l'antigène natif et l'antigène-enzyme conjugué pour un nombre limité de sites de liaison insolubles (41).

41

Résultats & Interprétation

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"Les esprits médiocres condamnent d'ordinaire tout ce qui passe leur portée"   François de la Rochefoucauld