2.3.5. Dosages biochimiques sanguins :
2.3.5.1. Dosage de glucose : selon la fiche technique
Spinreact a- Principe :
Le glucose est mesuré après une oxydation
enzymatique en présence du glucose oxydase. Le peroxyde
d`hydrogène formé réagit grâce à l`action
catalytique d`une peroxydase, avec un phénol et la 4- amino-
phénazone pour former un composé rouge violet de
quinonéimine qui sert d`indicateur coloré, selon les
réactions suivantes (29,30) :
GOD
B-D- Glucose + O2 + H2O Acide gluconique + H2O2
2H2O2+ phénol + 4- aminophénazone
Quinonéimine + 4 H2O
POD
b- Echantillon : Plasma.
c- Les réactifs utilisés
:
Réactifs
|
Composition
|
Concentration
|
Réactif (R1) Tampon
|
TRIS pH 7,4 phénol
|
92 m mol/ L 0,3 m mol/ L
|
Réactif (R2) Enzymes
|
Glucose oxydase (GOD) Peroxydase (POD)
4- aminophénazone (4- AP)
|
15000 U/L 1000 U/L 2,6 m mol/ L
|
Etalon
|
Glucose
|
100 mg/dl
|
|
d- Mode opératoire :
|
Blanc
|
Etalon
|
Echantillon
|
|
Réactif (ml)
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
|
Etalon (ul)
|
-
|
10
|
-
|
|
Echantillon (ul)
|
-
|
-
|
10
|
-Mélanger et incuber pendant 10 min à 37°C.
-Lire l`absorbance optique à 500 nm de l`étalon et
de l`échantillon contre le blanc dans les 30 minutes.
33
Résultats &
Interprétation
e- Calcul :
La concentration du glucose plasmatique est calculée par
la formule suivante :
[Glucose] (mg/dl) = x 100 (concentration de
l`étalon).
2.3.5.2. Dosage des triglycérides : selon la
fiche technique Spinreact.
a- Principe :
Les triglycérides sont déterminés
après une hydrolyse enzymatique par les lipases.
L`indicateur est une quinone formée d`après les
quatre réactions suivantes (31,32) :
Triglycérides + H2O Lipoprotéine
Glycérol+ Acide gras libres
lipase
Dihydroxyacétone- P+ H2O2
Glycerol + ATP Glycérol -3- phosphate +
ADP
Glycérol kinase
Glycerol -3-P+O2 Glycérol-3-P
oxydase
H2O2 + 4-AP+ P- Chlorophénol Quinone + H2O
POD
b- Echantillon : Plasma.
c- Les réactifs utilisés
:
|
Réactifs
|
Composition
|
Concentration
|
|
R1
Tampon
|
GOOD pH 7,5 P- chlorophénol
|
50 m mol/L 2 m mol/ L
|
|
R2
Enzymes
|
Lipoprotéine Lipase (LPL)
Glycérol kinase (GK)
Glycérol-3- P- Oxydase (GPO)
Peroxydase
4-Aminophénazone (4-AP) ATP
|
150000 U/L 500 U/L 2500 U/L 440U/L
0,1 m mol/ L 0,1 m mol/ L
|
|
Etalon
|
Triglycérides
|
200 m mol/L
|
34
Résultats &
Interprétation
? Préparation du réactif de travail
(RT) :
- Dissoudre le contenu du réactif R2 dans la fiole de
réactif R1.
- Mélanger bien la solution jusqu`elle devient
homogène. Ce réactif est stable pendant 6 semaines à
2-8°C ou une semaine à la température ambiante.
d- Mode opératoire :
|
Blanc
|
Etalon
|
Echantillon
|
|
RT (ml)
|
1,0
|
1,0
|
1,0
|
|
Etalon (ul)
|
-
|
10
|
-
|
|
Echantillon (ul)
|
-
|
-
|
10
|
- mélanger et incuber les tubes pendant 10 min à
15-25°C.
- Lire l`absorbance (A) de l`échantillon et de l`talon
contre le blanc à 505 nm dans les 30 minutes.
e- Calcul :
[Triglycérides] (mg/dl) = x 200
| 
