1. Etude phytochimique :
1.1. Origine du matériel végétal
:
Le matériel végétal est constitué
d`une racine à bulbe d`une espèce locale (algérienne)
cette dernière est récoltée de la région de
Chefachefa de la wilaya d`El-Taref le mois de juin en 2010, La plante
fraichement récoltée est conservée à l`ombre dans
un endroit sec et aéré, et d`une racine à bulbe d`une
espèce étrangère (chinoise) vendue sur le marché
algérien.
1.2. Tests préliminaires de la composition
chimique :
Dans ce travail, nous avons appliqué les tests
préliminaires sur les deux espèces d`ail (Algérien et
chinois).
? Quinones libres :
Un gramme de matériel végétal sec et
broyé est placé dans un tube avec 15 à 30 ml
d`éther de pétrole. Après agitation et un repos de 24 h,
les extraits sont filtrés et concentrés au rotavapor. La
présence de quinones libres est confirmée par l`ajout de quelques
gouttes de NaOH 1/10, lorsque la phase aqueuse vire au jaune, rouge ou violet
(26).
? Alcaloïdes :
Préparation d'extraits méthanoliques
:
Deux grammes de matériel végétal, sec et
broyé, sont ajoutés à 100 ml de méthanol 50 %.
Après une sonication de 15 min et agitation toute la nuit, les extraits
sont filtrés et évaporés à sec à l`aide d`un
évaporateur rotatif. Les résidus sont repris dans quelques ml de
méthanol pur. Ces extraits sont soumis aux deux tests suivants.
Test de Mayer :
À 0,5 g de matériel végétal en
poudre, on ajoute 15 ml d`EtOH 70 %. Après une sonication de 15 min et
une agitation de 20 h, on laisse reposer l`extrait jusqu`à
décantation complète, suivie d`une filtration et d`une
évaporation à sec. Le résidu est repris dans quelques ml
d`HCl 32 %.
La formation d`un précipité jaune, après
ajout de quelques gouttes du réactif de Mayer (mercuritétraiodure
de potassium), témoigne de la présence d`alcaloïdes (26).
27
Résultats &
Interprétation
? Terpénoïdes :
À un gramme de poudre ajouter 20 ml d`éther et
laisser macérer 24 heures puis filtrer. Prélever 10 ml du filtrat
précédent que l`on évapore à sec, dissoudre le
résidu dans un ml d`anhydride acétique puis ajouter un ml de
dichlorométhane et repartir la solution entre deux tubes à essai.
A l`aide d`une pipette ajouter un ml de H2SO4 concentré au fond du tube
sans agiter. La formation d`un anneau rouge brunâtre à la zone de
contact des deux liquides et une coloration violette de la couche surnageante
revèlent la présence de stérols et triterpènes :
c`est la réaction de Liebermann Buchard (27).
? Saponosides
Leur présence est déterminée
quantitativement par le calcul de l`indice de mousse, degré de dilution
d`un décocté aqueux donnant une mousse persistante dans des
conditions déterminées. Deux grammes de matériel
végétal sec broyé à tester sont utilisés
pour préparer une décoction avec 100 ml d`eau. On porte à
ébullition pendant 30 min. Après refroidissement et filtration,
on réajuste le volume à 100 ml. À partir de cette solution
mère, on prépare 10 tubes (1,3 cm de diamètre interne)
avec 1, 2, ... 10 ml, le volume final étant réajusté
à 10 ml avec de l`eau distillée.
Chacun des tubes est agité avec énergie en
position horizontale pendant 15 secondes. Après un repos de 15 min en
position verticale, on relève la hauteur de la mousse persistante en cm.
Si elle est proche de 1 cm dans le Xème tube, alors l`indice de mousse
est calculé par la formule suivante : I= hx . 5/0.0X
I . indice de mousse
hx . hauteur de mousse (en cm) dans le X
X . position de tube
La présence de saponines dans la plante est
confirmée avec un indice supérieur à 100 (26). ?
Coumarines
Test de détection : 2 g de matériel
végétal en poudre sont mélangés à
10 ml de CHCl3. Après un chauffage de quelques min et
une filtration, les extraits chloroformiques sont soumis à une CCM1, le
solvant étant le mélange toluène / AcEt (93:10). La
visualisation du chromatogramme, après migration, se fait à 365
nm en absence et en présence de NH3.
Test de confirmation : 1 g de poudre
végétale est placé dans un tube, en présence de
quelques gouttes d`eau. Les tubes sont recouverts avec du papier imbibé
de NaOH dilué et sont portés à
28
Résultats &
Interprétation
ébullition. Toute fluorescence jaune témoigne de
la présence de coumarines après examen sous UV (26).
? Flavonoïdes
a. Préparation des extraits :
100 ml de n- hexane sont ajoutés à 20 g de
poudre dans une fiole. La mixture est mélangée, couverte et
laissée reposer pendant 24h, puis filtrée sur papier filtre
Wattman stérile. Le filtrat jaune obtenu est concentré à
10 ml dans un bain-marie.
L`extrait concentré est refroidi et conservé au
réfrigérateur. Répéter la même
opération avec de l`éthyle acétate et de l`eau
distillée.
L`extrait aqueux est jaune pâle. L`extrait acétate
d`éthyle est vert foncé.
b. Un ml de NaOH à 10% est ajouté à 3 ml
d`extraits (aqueux, hexanique et acétate d`éthyle
précédemment préparés). L`observation d`une
coloration jaune dans l`extrait acétate indique la présence de
flavonoïdes (27).
? Tanins
1,5 g de matériel végétal sec sont
placés dans 10 ml de MeOH 80 %. Après 15 minutes d`agitation, les
extraits sont filtrés et mis dans des tubes. L`ajout de FeCl3 1 % permet
de détecter la présence ou non de tanins. La couleur vire au bleu
noir en présence de tanins galliques et au brun verdâtre en
présence de tanins catéchiques (26).
1.3. Identification de l'Alliine par chromatographie
sur couche mince (CCM) (15) :
Support : Gel de silice 60 F254 (séché
à Lair) (Merk ; 5x10, feuille).
Solution à examiner :
Mélanger 1 g de la poudre d`ail avec 5 ml de
méthanol, agiter environ 1 min et filtrer.
Le filtrat obtenu sert de solution à examiner.
Solution de référence :
Dissoudre en chauffant 5 mg d`alanine dans 5 ml de
méthanol et avec quelques
gouttes d`eau.
Dépôts :
20 ul de chaque solution à examiner et 10 ul de solution
de référence.
Solvants d`élution :
Ethanol- isopropanol- eau- acide acétique glacial (8 : 4 :
4 :4) (cuve saturée)
Développement : 8 cm Durée : 60 min
environ
29
Résultats &
Interprétation
Détection :
Après évaporation complète du solvant
(sous courant d`air chaud) pulvériser une solution à 0,2% de
ninhydrine dans un mélange isopropanol - acide acétique (95 : 5)
et chauffer pendant 5 min à 120°C.
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