II.3. Activité antimicrobienne
II.3.1. Activité antibactérienne de l'huile
essentielle
On a effectué des pré-tests dans le but de
sélectionner les souches sensibles à l'huile essentielle de la
plante étudiée.
· Mode opératoire : Le Protocol
suivi est celui décrit par Mazari et al (2010),
avec quelque modification (gélose PCA à la place de
Mueller-Hinton, étalement de la suspension à la place
d'écouvillonnage) :
- Préparer la suspension bactérienne
- 0.1ml de chaque suspension est étalée sur la
gélose PCA avec un râteau. Laisser sécher.
- A l'aide d'une pince stérile, imbiber un disque de
papier Whatman (6 mm de diamètre) dans 10 ul de l'huile essentielle puis
le déposer au milieu de la gélose ensemencée, après
diffusion de l'extrait durant 1 heure étuver les boites à
37C° durant 24 heures.
Tests :
Mode opératoire
· Préparation et concentration cellulaire des
Inoculums :
Les préparations des inoculums sont faites selon les
méthodes traditionnelles.
Les concentrations bactériennes des inoculums sont
évaluées par turbidité et sont exprimées par la
mesure de la Densité Optique (DO à 600 nm) sur un
spectrophotomètre. Une DO de 0.08-0.1 correspond à 108
UFC/mL. (Haddouchi et al, 2009)
II.3.1. 1. Aromatogramme sur milieu solide
Figure N°7 : Illustration de la
méthode des aromatogrammes sur boite de Pétri (Zaika ,
1988).
Mode opératoire
Le protocole suivi est celui décrit par Mazari et
al (2010) :
- ensemencer la gélose Mueller-Hinton avec la suspension
par la méthode d'écouvillonnage. Laisser sécher.
- Les disques de papier Whatman (6 mm de diamètre)
stériles imprégnés dans l'huile essentielle à
raison de 10 1/4l par disque, sont déposés stérilement sur
la surface de la gélose. ensemencée. . Le solvant DMSO a
été utilisé comme contrôle négatif. Des
antibiotiques standards : Tétracycline « TE » (30 1/4g /
disque), Trimethoprimsulphamethoxazol « SXT » (1.25 /23.75) 1/4g /
disque) et la Céfalexine
« CN » (30 1/4g / disque) ont été
utilisés comme témoins positifs. Chaque test est effectué
en triple.
- Après diffusion de l'extrait durant 1 heure
,étuver les boites à 37C° durant 18 à 24 heures.
- L'activité antimicrobienne est déterminée
à l'aide d'une règle mesurant le diamètre de la zone
d'inhibition.
II.3.1. 2. Aromatogramme sur milieu liquide Mode
opératoire
Le protocole suivi est celui de Bosio et al,
(2000) :
- Préparer la suspension bactérienne, mesurer la
densité optique.
- à l'aide d'une pince stérile saisir un disque de
papier Whatman (de 6mm de diamètre) et l'imprégner dans 10 ul de
l'HE , le déposer dans le tube contenant la suspension
bactérienne.
- incuber à 37C° durant 18 à 24 heures, puis
mesurer la densité optique (DO). - le test est effectué une seule
fois.
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