Sur gélose au sang et gélose chocolat, les
colonies de Streptococcus pneumoniae sont petites, grisâtres,
muqueuses (en gouttes de rosée) entourées par une zone
verdâtre d'hémolyse alpha. Une loupe grossissement 3fois ou un
microscope (30x-50x) permet de distinguer les pneumocoques des streptocoques
"viridans" alpha hémolytiques. Les types de colonies sont bombés
quand elles sont jeunes, mais après 24-48 heures le centre des colonies
de pneumocoques se déprime alors que les colonies de streptocoques
"viridans" gardent leur apparence. Pour optimiser les résultats, il est
recommandé de toujours incuber les boites sous CO2.
-Test de sensibilité à
l'optochine
Identification présomptive de Streptococcus
pneumoniae consiste à examiner la sensibilité de la souche
à l'optochine.
Réalisation du test
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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et
Jacques Fêmi SETONDJI
Utilisation comparée de la gélose chocolat
à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose
chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la
culture de trois espèces bactériennes méningées
-Toucher une colonie suspecte alpha hémolytique avec une
anse stérile et ensemencer en stries sur la gélose au sang.
-Déposer un disque à l'optochine ou un disque
"p" de 6mm de diamètre (contenant 5ug
d'éthylhydrocupréine) à l'extrémité de la
strie, là où a commencé l'ensemencement. Trois ou quatre
colonies peuvent être testées sur la même boite.
-Incuber 18-24 heures à 35°C dans un incubateur
à C O2 ou sous une
cloche à bougie.
Lecture des résultats
Les souches alpha hémolytiques présentant une
zone d'inhibition supérieure à 14mm sont des pneumocoques. Les
souches alpha hémolytiques sans zone d'inhibition sont des streptocoques
"viridans"
III-3-IDENTIFICATION DE Haemophilus influenzae
Des petits bacilles ou coccobacilles Gram négatifs,
qui ne se cultivent qu'en présence des facteurs x et v, qui poussent sur
gélose chocolat et pas sur gélose au sang, qui ont une odeur
âcre d'indole et n'agglutinent pas avec un immunsérum
anti-méningocoque peuvent être Haemophilus influenzae. En
absence de vaccination, la plupart des cas de méningite à
Haemophilus influenzae sont de sérotype b.
-Détermination du sérotype l'
Haemophilus influenzae
La réalisation du test est comparable à celle
décrite pour Neisseria meningitidis, si ce n'est le choix de
l'immunsérum. Les isolements de Hib présumés seront
testés à la fois avec l'immunsérum anti Haemophilus
influenzae type b, un antisérum vis-à-vis de l'un des autres
types et un soluté salin. Une forte réaction positive avec
l'immunsérum anti-b et l'absence de réaction antisérum
dirigé contre un autre type et le soluté
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Présenté et soutenu par Antoine A. DANSOU et
Jacques Fêmi SETONDJI
Utilisation comparée de la gélose chocolat
à base d'hémoglobine en granulées et de la gélose
chocolat à base de sang de mouton défibriné pour la
culture de trois espèces bactériennes méningées
salin sont des éléments de présomption
en faveur de Haemophilus influenzae type b (Hib). Si l'isolement n'est
pas agglutiné par l'antisérum anti-b, il faut le tester avec un
antisérum polyvalent. En cas de positivité, tester les
sérums monovalents (a, c, d, e, f) pour déterminer le
sérotype. Si le résultat est négatif, la souche est
probablement non typable. La mise en évidence des besoins en facteur x
et v est nécessaire pour confirmer l'identification de Haemophilus
influenzae ou envisager une autre espèce de
l'Haemophilus.
Réalisation du test
-Faire une suspension opalescente de bactéries dans 10ul
de formol à 0,5% salé, après une nuit d'incubation sur
gélose chocolat.
-Transférer une anse (5ul) de la suspension
bactérienne sur une lame nettoyée à l'éthanol
divisée en trois zones.
-Dans chacune des zones ajouter respectivement un même
volume d'un antisérum anti-Hib, d'un antisérum spécifique
d'un type différent, et de soluté salin.
-Mélanger avec un bâtonnet et agiter doucement la
lame par un balancement pendant une minute.
Lecture des résultats
Seules les réactions d'agglutination nette sont
considérées comme positives. Les bactéries sont alors
agglutinées et le liquide de suspension paraît clair. Si une
souche réagit avec plus d'un antisérum, elle est
considérée comme non typable.
