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I-3-2-Analyses microbiologiques de poudre du lait :
Le lait en poudre est un produit très riche en
éléments nutritifs qui peuvent favoriser la croissance de divers
micro-organismes surtout dans le cas oü l'hygiène et les conditions
de fabrication, ainsi que celles du conditionnement ne sont pas
respectées c'est pour cette raison qu'on réalise des analyses de
contrôle de la qualité de la poudre du lait avant la
reconstitution.
A- Dénombrement de la flore aérobie
mésophile totale
· Préparation des dilutions
+La dilution mère:
Introduire aseptiquement dans un flacon stérile en verre
10 g de poudre du lait, ajuster avec le liquide Ringer jusqu'à 100
ml.
+ Les dilutions décimales :
Introduire aseptiquement à l'aide d'une pipette
stérile 1ml de la dilution mère dans un tube stérile
contenant au préalable 9ml du diluant (liquide Ringer), on obtient donc
la dilution 10-2.
A l'aide d'une autre pipette stérile introduire 1 ml de
la dilution (10-2) obtenue dans un tube stérile contenant au
préalable 9 ml du diluant (LR), on obtient la dilution 103 ;
de la même façon préparer les dilutions
(10-4,10-5).
· La technique d'ensemencement
L'ensemencement par 1 ml de chaque dilution
(10-1,10-2, 10-3,
10-4,10-5) S'effectue en masse sur milieu PCA.
Deux témoins sont toujours réalisés, l'un
pour le milieu PCA, l'autre pour le diluant (LR), L'incubation des boites est
réalises à 30 °C pendant 72h.
· Expression des résultats:
v' Les colonies sont comptées quelle que soit la taille,
à l'oeil nu.
v' Ne compter que les boites contenant de 15 à 300
colonies.
v' Le nombre de microorganisme par millilitre est calculé
à l'aide de la formule précédente.
N=ÓC/ (n1+0,1 n2+...) d
Solution mère
Incubation 72 h à 30°C
1 ml
10g de poudre 90ml de L.R
10-1 10-2 10-3
PCA
PCA
9 ml de liquide Ringer 1/4 dans chaque tube
1 ml 1 ml
temoin
Dénombrement des colonies
PCA
PCA
PCA
PCA
PCA
1 ml 1 ml
temoin
10-4 10-5
PCA
PCA
L.R
L.R
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Figure N°8 : Dénombrement des germes totaux
de la poudre de lait
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B-dénombrement des coliformes totaux et
coliforme fécaux :
· mode opératoire :
> Ensemencer 3 tubes de milieu liquide BLBVB (avec cloche de
Durham) avec 1ml de la dilution mère.
> Incuber à 37°C pendant 48h
> Après incubation réaliser un repiquage sur 3
autres tubes contenant le milieu BLBVB (avec cloche de Durham) et incuber
à44°C pendant 24h.
· Expression des résultats :
v' Un résultat positif s'exprime par le virage du milieu
au jaune, avec production de gaz au moins à1/10 de la cloche.
v' Le nombre des coliformes est déterminé avec la
table de NPP de la poudre. (Annexe N°6).
Milieu BLBVB
+cloche
Milieu BLBVB
+cloche
Milieu BLBVB
+ cloche
1ml
Solution mère
1ml
1ml
Incubation 48 h à 37°C
pour dénombrement
de CT
Repiquage
(Avec quelques gouttes de chaque tube)
Incubation 24 h à 44°C
pour dénombrement
de CF
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Lecture
Figure N°9: Recherche et dénombrement des
coliformes fécaux et totaux
dans la poudre de lait
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