Les mesures du potentiel
transépithèlial
La chambre de perfusion est construite de telle façon
qu'elle puisse loger une électrode qui reste constamment en contact avec
le bain dans le-quel est plongé le tubule. Cette électrode
me-sure le potentiel extratubulaire. Une autre électrode est en contact
avec le liquide de perfusion, elle mesure, donc, le potentiel intratubulaire.
Un dispositif relié à ces deux électrodes permet la mesure
de différence de ces deux potentiels, ce qui donne la valeur de la
différence des potentiels électriques
transépithèliaux.
Avant que la tubule soit perfusé, on plonge la pipette de
perfusion dans le bain et on me-sure le potentiel "à vide". Ceci nous
permet de régler le zéro électrique.
Titration de l'ion Cl- dans les petits
volumes
On dépose de petites quantités de la solution
à titrer sous une couche d'huile saturée en eau. Cette
précaution doit être prise car les solutions manipulées
peuvent avoir des concentrations très faibles ( de l'ordre de 1
0-4M ) donc toute évaporation est susceptible de
modifier sensiblement la concentration. A l'aide d'une micropipette on
dépose de petites gouttes ( 10-3ì L ) sur une plaque
d'argent. Grâce à une constriction à
l'extrémité de la pipette les gouttes déposées ont
un volume reproductible à #177;3%. Ensuite une électrode est
plongée dans la microgoutte. Cette électrode est relié par
un pont agar à une solution de NaNO3 (1 M) qui à son
tour est relié par un autre pont agar à une solution
d'AgNO3 (1M) dans laquelle plonge un fil d'argent relié au titrateur.
L'autre borne du titrateur est reliée à la plaque d'argent sur
laquelle est posée la goutte. Lorsqu'on établit un courant les
ions Ag+ sont libérés de la plaque d'argent et ils
réagissent avec les ions Cl- présents dans la goutte.
Les molécules d'AgCl précipitent. Grâce aux deux
électrodes on peut enregistrer
une baisse de potentiel. Si on inclut un condensateur dans le
circuit et si on le charge lors de la titration, la charge de ce
condensateur est proportionnelle à la quantité du courant qui est
passé dans
le circuit pendant la titration.
Pour obtenir les valeurs de concentration du liquide
collecté on dépose d'abord des gouttes de la gamme de la
façon décrite. On utilise trois solutions 50, 100 et 150 mM.
Lorsqu'on titre ces trois solutions, les résultats obtenus peuvent
être placés sur une droite pour laquelle on connaît la
concentration en NaCl et la charge du condensateur correspondante pour trois
points. Les concentrations inconnues des gouttes déposées
à partir du liquide collecté sont déterminées par
rapport à ces trois points.
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