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Analyse de la diversité des champignons mycorhiziens à  arbuscules associés au maà¯s dans quatre zones de production en Côte d'Ivoire


par Kouadio Meliton Djezou
Université Felix Houphouet Boigny de Cocody  - Master  2021
  

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ANNEXES

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Annexes 1 : Méthodes d'analyse physico-chimique des échantillons de sol

? Dosage du carbone organique

Pour le dosage du carbone organique, la méthode de Walkley- Black a été utilisée.

Peser 5g de sol et l'introduire dans l'erlenmeyer ;

Verser 10 ml de K2Cr2O7 à l'aide d'une pipette ;

Ajouter 10 ml de H2SO4 concentré à l'aide d'une pipette automatique ;

Ajouter 100 ml d'eau déminéralisée plus quelques gouttes de phénantroline ;

Agiter sur un agitateur magnétique puis titrer avec le sel de Mohr jusqu'au virage.

? Dosage du phosphore assimilable

Le phosphore est présent dans le sol sous diverses formes dont le phosphore assimilable et le phosphore total. La teneur en phosphore assimilable a été déterminée par la méthode Bray-l. Cette méthode consiste à faire réagir l'ion orthophosphate avec l'ion molybdate et l'ion antimoine pour former un complexe phosphomolybdate après digestion et oxydation de toutes les formes de phosphore avec du persulfate de potassium en milieu acide sous pression à 121 °C.

Peser 5 g de sol dans une fiole erlenmeyer ;

Ajouter 35 ml de solution d'extraction dans les fioles erlenmeyer et agiter à la main pendant une minute au moins ;

Filtrer immédiatement les solutions obtenues ;

Prélever 5 ml du filtra dans une fiole jaugée ;

Ajouter 10 ml molybdate d'ammonium 1% ;

Agiter à la main et ajouter 2 ml de chlorure de cyanure ;

Bien mélanger et compléter le volume avec de l'eau distillée ;

Laisser pendant 5 minutes et commences mesurer au spectrophotomètre l'intensité de la coloration bleue du molybdate selon l'ordre de préparation des solutions colorantes.

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? Dosage de l'azote total

L'azote peut se trouver sous forme minérale et organique (protéines, phosphoamino-lipides...) ; pour le doser dans sa totalité, il faut détruire les composés organiques de manière à obtenir tout l'azote sous une même forme minérale. Pour le dosage de l'azote total, la méthode de Kjeldahl a été utilisée.

Peser dans un papier 1g d'échantillon de sol. Plier le papier et introduire la prise d'essai dans un matra. Faire un témoin avec le papier.

Ajouter dans les matras :

- un comprimé de catalyseur Kjeldahl - 10 ml de H2SO4 concentré d = 1,83

- 10 ml de H2O2 à 110 volumes, les ajouter très doucement, en évitant les projections et en opérant sous la hotte

Placer les matras sur le bloc de minéralisation préalablement réglé sur 800° C sous la hotte et les coiffer des cloches d'évacuation de vapeur. Chauffer jusqu'à ce que les minéralisants soient limpides. Retirer les matras du bloc, les laisser se refroidir. Ajouter 30 ml d`eau déminéralisée dans les matras et bien mélanger afin d'éviter la cristallisation

Préparer un bécher de 250 ml, y verser 50 ml de la solution déminéralisée plus 20 ml d'acide borique avec indicateur coloré et le placer sous l'appareil à distillation. Vérifier que l'embout plonge dans la solution. Ajouter 40 ml de soude en abaissant la poignée alkali. Abaisser la manette steam en position open

Effectuer le dosage rapidement après la fin de la distillation avec l'acide sulfurique 0,1N ou 0,2N jusqu'au virage de l'indicateur coloré (passage du vert au rose violet). Neutralisation à pH = 4,95

? Capacité totale d'échange et bases échangeables

La méthode à l'acétate d'ammonium pH = 7. Alors 10g de sol sont introduits dans une colonne de percolation. Du coton est placé au niveau inférieur pour éviter l'entraînement des particules. La percolation à l'acétate permet de déplacer les bases échangeables. La capacité totale d'échange est déterminée par dosage des ions ammoniums échangés l'ion K+ du KCl.

- Extraction des bases et dosage de Ca2+, Mg2+, Na+, K+

Mettre 10g de sol dans une colonne de percolation ;

le robinet étant fermé, saturer le sol avec l'acétate d'ammonium pendant une nuit ;

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placer une fiole de 100 cm3 sous le robinet et l'ouvrir à débit faible (goutte à goutte) ;

rajouter l'acétate NH4 par fraction jusqu'à remplissage de la fiole (trait de jauge), on estime que les bases échangeables du complexe absorbant sont remplacées par l'ion NH4+.

laver le sol avec 100 ml d'éthanol (95%) et jeter le liquide ;

ensuite percoler 250 ml de KCl et le recueillir dans une fiole de 500 ml

prendre 10 ml du percolât à la pipette, le verser dans un bécher ;

diluer à 50 ml avec l'eau distillée ;

ajouter 1 ml de KCN à 1% et 5 ml de chlorhydrate de tri éthanol amine 50% ;

ajouter 10 ml de soude ;

ajouter 4 gouttes de solution de calceïne ;

titrer avec EDTA N/50.

Dentiscutataceae

Villes

Glomeraceae

Racocetraceae

Pacisporaceae

Gigasporaceae

Entrophosparaceae

Ambisporaceae

Acaulosporaceae

Scutellosporaceae

Diversisporaceae

Paraglomeraceae

Sacculosporaceae

Archaeosporaceae

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