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Association Méditerranéenne
Francophone d'Imagerie et de
Cytométrie
Colloque PHC Volubilis
Comité Mixte
Inter-universitaire Franco-Marocain
Ambassade de France au
Maroc
Service de Coopération et d'Action Culturelle
Atelier de Cyométrie en flux
Mr. Mohamed Boumhras, Dr Ouafaa El Maataoui, Dr. Brahim
Farouqi et Pr. Gérard Lizard
Le 6 Décembre 2001
Au Laboratoire d'immunologie
Centre Hospitalier
Universitaire Ibn Rochd
Casablanca-Maroc
Programme
- 15 :00 - 15 :15 Instrumentation : Cytométrie en
flux
- 15:15 - 15:45 Stress oxydant : mesure de radicaux
oxygénés
- 15:45 - 16:30 Stress et organites cellulaires :
perméabilité membranaire et potentiel mitochondrial
- 16:30 - 17:15 Apoptose et cycle cellulaire
- 17 :15 - 18h Discussion : applications des techniques
présentées aux programmes de recherche des
participants
CYTOMETRIE EN FLUX (CMF)
(Mohamed
Boumhras)
1. Généralités
La CMF est une technologie qui permet la mesure simultanée
de plusieurs caractéristiques physiques d'une cellule. Les informations
apportées sur la cellule analysée par CMF sont :
Sa taille relative (Forward Scatter),
Sa granularité ou sa complexité interne relative
(Side Scatter),
Son intensité relative de fluorescence.
Le principe de fonctionnement d'un cytomètre en flux est
résumé dans la figure 1.
Figure 1: Principes de fonctionnement d'un
cytomètre en flux analyseur / trieur de cellules.
2- Domaines d'application de la CMF:
2-1 Analyses cellulaires:
Les cellules injectées au centre d'une veine liquide
indépendante (le liquide de gaine) adoptent une progression
particulière en file indienne (hydrofocalisation et écoulement
laminaire). Le flux tombe à l'air libre et croise un faisceau laser qui
illumine une à une les cellules durant quelques us , les cellules
défilant à la cadence moyenne de 1000 cellules / s. Suite
à cette excitation lumineuse,
chaque cellule diffuse une partie de la lumière
incidente et émet simultanément une ou plusieurs fluorescences en
fonction des sondes fluorescentes qu'elle porte. Les signaux lumineux
captés par une optique appropriée sont transmis à des
détecteurs photoélectriques puis à un ordinateur qui
mémorise toutes les données individuelles et dans l'ordre de
passage de chaque cellule.
2.3 Tri cellulaire: une fragmentation
contrôlée du flux liquide en 30.000 gouttes / s conduit à
l'emprisonnement de chaque cellule dans une goutte peu après l'analyse
dans un délai parfaitement connu par la machine durant lequel elle
décidera de charger électrostatiquement chaque goutte contenant
une seule cellule intacte et viable répondant à des
critères désignés par le chercheur. Les gouttes
chargées sont déviées de leur chute initiale par un champ
électrique constant et dirigées vers des flacons
récolteurs.
Figure 2 : Principe du tri cellulaire dans l'air
par gouttelettes
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