1. ANALYSE QUANTITATIVE
Elle permet de mesurer le nombre absolu de cellules contenues
par unité de volume de sang. La technique manuelle, historique
maintenant, consistait à placer dans une cavité (cellule de
Malassez) de verre, de volume exactement connu, du sang dilué dans un
réactif approprié à la catégorie de cellules que
l'on veut étudier. Les éléments tombent en quelques
minutes au fond de la « cellule » où l'on peut les
compter sous un microscope, un quadrillage régulier du fond facilitant
le décompte.
Un calcul simple tenant compte de la dilution et du volume des
cellules donne finalement le nombre d'élément rapporté en
mm3. Cette technique manuelle a pour inconvénient
d'être à la fois longue et imprécise (10 à 20 %
d'erreurs). Elle est remplacée par des compteurs électroniques
qui permettent d'effectuer les mesures, beaucoup plus rapidement et, avec une
marge d'erreurs beaucoup plus faible. Cette marge d'erreurs reste cependant de
2 à 6 % pour les globules rouges et les globules blancs et de plus ou
moins 15 % pour les plaquettes.
Ces compteurs permettent à partir d'un petit
échantillon de sang prélevé sur anticoagulant de compter
simultanément globules rouges, globules blancs, plaquettes et, sont de
plus en plus souvent associés à un analyseur qui fournit la
« formule
sanguine ».[11]
1.1 Mesures quantitatives sur les globules rouges et leur
contenu [2,11]
La quantité de globules rouges présente dans un
échantillon de sang peut être appréciée par trois
mesures : celle du nombre de globules rouges, celle de
l'hématocrite et celle du taux d'hémoglobine. Si en pathologie
ces trois mesures évoluaient toujours parallèlement,
l'étude de l'une d'elles serait suffisante. Comme on peut observer des
modifications dissociées de ces trois variables, leur mesure conjointe
est indispensable. Les compteurs électroniques modernes assurent
simultanément ces trois mesures.
· Nombre normal des globules rouges
[11]
Il est indiqué dans le tableau I
TABLEAU I. Numération des globules
rouges
(résultats normaux par mm3)
|
Homme............... ......................4,5 à
6,2. 106
Femme et enfant jusqu'à la puberté......4
à 5,4. 106
Enfant(1 an).................................3,6 à 5.
106
Nouveau-né ..................................5 à
6. 106
|
· Hématocrite
[11,15]
La centrifugation d'un petit volume de sang dans un tube
gradué permet la lecture directe des volumes relatifs du plasma et des
globules rouges (les autres cellules forment une mince couche
négligeable à la surface des globules rouges). La mesure se fait
dans des microtubes centrifugés à la haute vitesse. Dans les
compteurs automatiques, l'hématocrite est en revanche calculé
à partir du volume globulaire moyen.
TABLEAU II. Hématocrite
normal
|
Homme...................................................40
à 54 %
Femme....................................................35
à 47 %
Enfant (1an)...............................................36
à 44 %
Nouveau-né...............................................44
à 62 %
|
· Taux d'hémoglobine
[2,11]
On dose l'hémoglobine dans un échantillon de
sang par diverse méthodes, mais une seule est aujourd'hui retenue :
la méthode de cyanméthémoglobine dans laquelle
l'hémoglobine et tous ses dérivés sont transformés
par un réactif à base d'acide cyanhydrique en
cyanméthémoglobine qui est dosée sur un
spectrophotomètre. Les résultats en sont exprimés par
100ml de sang.
Le taux d'hémoglobine est fonction du sexe et de
l'âge (tableau III)
TABLEAU III. Hémoglobine normale (
pour 100ml)
|
Homme .........................................................
13 à 18 g
Femme.............................................
.............12 à 16 g
Enfant
(1an)..................................................... 12 à 16 g
Nouveau-né.....................................................
14 à 20g
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· Volume et contenu des globules rouges
[2, 11,15]
Le contenu du globule rouge dépend de la
quantité d'hémoglobine synthétisée au cours de
l'érythropoïèse et du volume de l'hématie. On les
apprécie essentiellement par le calcul des constantes dites de
Wintrobe : volume globulaire moyen (VGM), concentration corpusculaire
moyenne en hémoglobine (CCMH) et teneur corpusculaire moyenne en
hémoglobine (TCMH).
ü V.G.M
Il se fait en divisant le volume globulaire compris dans
1mm3 de sang (fourni par l'hématocrite) par le nombre de
globules rouges contenus dans le même volume (fourni par la
numération).
La normale se situe entre 85 et 95 u3. En dessous
de 85 u3, on parle de microcytose ; au dessus de
95u3 de macrocytose ; dans les limites normales de
normocytose. En pratique cependant, tenant compte des incertitudes sur
les mesures, une microcytose ne peut être affirmée qu'au dessous
de 83u3, si elle est constante, et une macrocytose au dessus de
97u3. Il existe chez le petit enfant une microcytose (75-80
u3) qui semble physiologique.
ü C.C.M.H.
Le calcul consiste à diviser le dosage
d'hémoglobine par celui de l'hématocrite. On rapporte ainsi la
quantité d'hémoglobine à l'unité de volume des
globules rouges.
Le résultat normal est compris entre 0,32 et 0,36
exprimé en pourcentage (%). La CCMH peut être abaissée en
dessous de 0,32 quand le contenu en hémoglobine des globules rouges par
unité de volume est insuffisant : il y a hypochromie. Lorsque la
CCMH est comprise entre 32 et 36 %, il y a normochromie. En revanche, il y
jamais d'élévation de la CCMH au dessus d 36 %, (sauf erreur
technique ou microsphérocytose) : il n'existe pas
d'hyperchromie.
ü T.C.M.H.
Elle a moins d'intérêt physiologique que la CCMH
ou le VGM. Elle s'obtient en divisant le résultat du dosage
d'hémoglobine par le nombre de globules rouges et indique le poids moyen
d'hémoglobine par globule, soit à l'état normal 29 #177; 2
ãã. Elle dépend à la fois du contenu en
hémoglobine par unité de volume et du volume globulaire.
· Numération des réticulocytes
[11]
Les réticulocytes sont des globules rouges jeunes qui
sont identifiables dans le sang environ 24 heures.
La durée de vie moyenne des globules rouges est
d'environ 120 jours. Ces réticulocytes représentent donc environ
1% des globules rouges. Pour les mesurer, on les met en évidence sur
frottis sanguin à l'aide de certains colorants comme le bleu de
méthylène. Ceux-ci font précipiter dans ces
« réticulocytes » les organites cytoplasmiques (ARN
messagers en particulier) qu'ils comportent encore et qui disparaissent dans
les globules rouges plus âgés. C'est ce que l'on appelle la
« substance réticulo-filamenteuse ».
On estime sur 100 globules rouges environ, le pourcentage de
ceux qui sont des réticulocytes. Pour que ce résultat puisse
être interprété, il faut exprimer en nombre absolu en
rapportant ce pourcentage au nombre total de globules rouges par
mm3. En effet un taux normal de réticulocytes se situe entre
25.000 et 100.000 par mm3 pour un taux d'hémoglobine normal.
Il existe depuis peu une technique automatique de décompte des
réticulocytes.
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