CHAPITRE DEUXIEME : MATERIEL ET METHODES
II.1
MATERIEL BIOLOGIQUE
Au cours de notre travail nous nous sommes
servis de vingt Primates détenus en captivité dans la ville de
Butembo.
II.2.
Méthodes
Récolte des échantillons
+
Les animaux ont été pris au hasard dans
différents lieux de détention sans tenir compte de leur
âge, sexe ou de leur état de santé. Le seul
paramètre pris en considération était leur appartenance
à l'ordre des Primates.
Les selles étaient directement prélevés
à partir de leur cage au moyen d'une curette et directement
empalés dans des sachets à plastic et amené au laboratoire
pour l'analyse.
Recherche et identification des parasites
Pour identifier les parasites nous avons utilisé trois
méthodes : l'examen microscopique direct suivi de deux
méthodes des concentrations parasitaires dont : la méthode
de concentration par le formol Ether ou sédimentation et la
méthodes de Willis.
Méthodes de concentration de Willis
* Dans un flacon de pénicilline, on place un morceau
de selle d'environs 2g
* Remplir le quart du flacon avec la solution de
Willis
* A l'aide d'un applicateur écrasé le morceau
de selle et bien mélangé dans la solution puis remplir
avec la solution de Willis (Na Cl 25%). La solution doit âtre
parfaitement homogène
* Déposé soigneusement une lamelle sur
orifice du flacon
* Vérifier que la lamelle recouvre
complètement le liquide sans bulle d'air
* Laisser reposer la préparation pendant 30minutes,
pour que les oeufs remontent en surface et adhèrent à la
lamelle
* Retirer avec précaution la lamelle à la
quelle doit adhérer une goutte de liquide
* Déposer sur la lame et examiner
immédiatement au microscope car la préparation se
dessèche très rapidement.
Méthode de Concentration par le Formol Ether ou
Sédimentation
* Dissoudre environ 2g de selle dans 10ml d'eau physiologique.
* Tamiser cette solution sur un morceau de
compresse et recueillir dans un tube à centrifuger.
* Centrifuger pendant une minute à 2500 tours
* Eliminer le surnageant et remettre le culot en
suspension dans 8ml de la solution de formol à 10%
* Le selle reposé 5 minutes
* Ajouter 3ml d'éther et émilsionner par
agitation
* Centrifuger une minute à 500 tours et en fin
rejeter le surnageant puis prélever le culot et examiner. Cette
méthode permet de mettre en évidence les oeufs d'helminthes et
les kystes protozoaires.
Méthodes d'examen microscopique direct
Sur une lame porte objet, un petite quantité de selles
est mis en suspension dans une goutte d'eau physiologique. Après
couverture de la lame par une lamelle la préparation est examinée
au microscope au faible grossissement (X 40) (LAVEY, 1982).
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