Chapitre I : Généralités
3.1.2 Structure moléculaire :
Les hydrates de carbone abondants qui caractérisent la
ML se trouvent dans le maillage fibrillaire. Ce dernier est formé par un
type majeur de glycoprotéines fortement glycosylées, les mucines,
portant essentiellement que des O-glycanes. La composition en monosaccharides
de la ML, est formée seulement de galactose (Gal),
N-acétylgalactosamine (GalNAc) et N-acétylglucosamine
(GlcNAc).
Par ailleurs, il a été démontré
que la paroi du kyste d'E. granulosus contenait de grandes
quantités de myo-inositol hexakiphosphate (InsP6).
4. Effet immunomodulateur des helminthes chez l'homme et
l'animal : 4.1 Données chez l'homme :
Deux rapports rapportant l'utilisation des helminthes pour le
traitement des MICI chez l'homme, Suggèrent que l'exposition aux
helminthes a un effet bénéfique sur la MC et la RCH. Dans ces
études, les patients RCH et MC ont été traités
directement avec les oeufs de Trichuris suis (TSO), résultant
en une amélioration clinique significative chez près de 80% des
patients MC et des effets plus modestes chez les patients RCH (Summers et
al., 2005).
4.2 Données chez l'animal :
Une variété de modèles animaux de colite
ont été développés. Ces modèles reproduisent
un grand nombre des particularités et caractéristiques des MICI
humaines.
Même si aucun des modèles ne représente
complètement les MICI chez l'homme, ils ont néanmoins
été extrêmement utiles dans la compréhension de leur
pathogenèse. La première publication sur la modulation par les
helminthes d'une colite murine a montré que les aspects de la colite
expérimentale induite par le DSS étaient améliorés
chez les animaux infectés par le ténia Hymenolepis
diminuta (Reardon et al., 2001).
Plus récemment, une étude menée au sein
de notre équipe a mis en évidence l'effet protecteur de la
membrane lamellaire d'Echinoccocus granulosus au cours d'un
modèle de colite induite par le DSS (Soufli et al., 2015).
D'autres travaux sur un modèle de colite induite par le
dinitrobenzène acide sulfonique (DNBS) ont montré que l'infection
de souris par le nématode parasite, Trichinella spiralis, avait
un effet protecteur. De plus, une étude a utilisé les
protéines solubles de S. mansoni au cours d'un modèle de
colite induite par le TNBS (Hunter & McKay ; 2004).
En outre, plusieurs études ont rapporté
l'utilisation des helminthes et de leurs dérivés pour le
traitement au cours de modèles expérimentaux d'autres maladies de
nature inflammatoire, tel que la polyarthrite rhumatoïde, la
sclérose en plaque et le diabète de type 1 (Bashi et
al., 2015).
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Souris BALB/c
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Eau de boisson
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Témoin (n=4)
DSS (n=4)
DSS+ML (n=4)
DSS a 3% dans l'eau de boisson
Extrait soluble de la ML
Injection IP de l'extrait soluble de la ML.
j0 j1 j 2 j3 j4 j5 j6 j7 j8 j9 Jours
Euthanasie des animaux à J9
Récupération des
macrophages
péritonéaux
Lavage péritonéale avec PBS stérile pH=7
Ponction cardiaque
Récupération du sang sur
tube à EDTA
Récupération du côlon
Mesure de la longueur du
côlon
Récupération du plasma
Centrifugation 4000rpm à10min
Récupération des surnageants de culture
Mise en culture dans du DMEM 20 à 22h à 37°C,
5%CO2
Adhésion 1h30
Dosage du NO par la méthode de Griess modifiée
Etude histologique Coloration H&E
Centrifugation 3000rpm à 10min
Fragments du côlon distal
Kyste hydatique
Extraction
Membrane lamellaire
Sonication (ML) Broyage
Décontamination Décontamination
Extrait brut Extrait soluble
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Patients atteints de MICI
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Isolement PBMC sur gradient de Ficoll
Prélèvements sanguins
Mise en culture pendant 20h avec du RPMI 1640 à 37°C,
5% CO2
Maladie de Crohn (n=13)
Rectocolite hémorragique (n=4)
Prélèvements sanguins
Isolement PBMC sur gradient de Ficoll
Mise en culture pendant 20h avec
du RPMI 1640 à
37°C, 5% CO2
+/-
Concentrations croissantes de l'extrait brut [ML]=10/25/50/60
ug/ml
Surnageants de culture
+/ +/-
Concentrations
croissantes
[IL-4]=1/10/100 ng/ml
Concentrations
croissantes de
l'extrait
brut
[ML]=10/25/50/60
ug/ml
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Dosage du NO par la
méthode de Griess
modifiée
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Surnageants de culture
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22
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