3. Echantillonnages
Lors d'une culture en taillis à très courte
rotation, les arbres sont coupés à 10 cm du sol. De la souche
repartent alors plusieurs tiges (rejets de souche) plus ou moins
épaisses qui seront de nouveau coupées deux à quatre ans
plus tard (Figure 2). L'échantillonnage a été
réalisé à partir d'un morceau du tronc du brin dominant en
sortie d'hiver 2018 (pour ECH) et 2019 (pour SCV). Les taillis avaient alors
neuf ans et avaient déjà subi deux rotations. Le tronc des arbres
fait partie des organes pérennes pouvant stocker l'amidon et les sucres
solubles qui s'accumulent en fonction des saisons (Sauter & Neumann, 1994 ;
Sauter & van Cleve, 1994). Les échantillons ont été
conservés dans de la carboglace sur le terrain, puis au
congélateur (à -20°C) avant d'être lyophilisés
et réduits en poudre fine. À noter que l'écorce n'a pas
été enlevée avant le processus.
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Figure 2 : Schéma explicatif de la culture en
taillis à très courte rotation
4. Dosage des glucides non structuraux
Le détail des protocoles est disponibles en Annexe 2.
Sucres solubles
Le protocole suivant a été adapté
à partir des travaux de Monsigny (1988). Pour chaque échantillon,
20 mg de poudre ont été pesés auxquels on a rajouté
1ml d'éthanol 80%. L'extraction des sucres solubles se faisant à
l'éthanol chaud, les tubes ont donc été chauffés
à 90°C au bain marie sec pendant 10 minutes puis ont
été passés à la centrifugeuse (10900 rpm) durant 10
minutes supplémentaires. Le surnageant contenant les composés
solubles a été transvasé dans un autre tube puis
l'extraction a été réalisée une deuxième
fois afin de récupérer les sucres qui étaient
restés dans le culot. Le dosage se fait à partir des deux
surnageants préalablement mélangés par un test
colorimétrique en plaque multi-puits après incubation à
90°C au résorcinol et à l'acide sulfurique
(H2SO4). Les absorbances sont lues au spectrophotomètre
à 480 nm.
Amidon
Après avoir récupéré et
séché les culots obtenus suite à l'extraction des sucres
soluble, de l'á-amylase thermostable et de l'amyloglucosidase (kit
Megazyme®) ont été ajoutés pour hydrolyser l'amidon
en D-Glucose. Les réactions se font également à chaud
(respectivement 90 et 50°C) et le dosage se fait par test
colorimétrique en plaque multi-puits avec des triplicats techniques
après incubation à 50°C et réaction avec la solution
de GOPOD (kit Megazyme®). Les absorbances sont lues au
spectrophotomètre à 510 nm.
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