Memoire Online - Développement d'une technologie en bactériologie : l'aromatogramme

ANNEXE I : RETRANSCRIPTION D'UN ENTRETIEN AVEC
MADAME MARTINEAU MARTINE, TECHNICIENNE DE
LABORATOIRE CHEZ LABOVET CONSEIL, SITE LES ESSARTS,
FRANCE, LE 29 AVRIL 2021

Dans quelles indications réalisez-vous des aromatogrammes et/ou phytogrammes ?

Pour ce qui est des phytogrammes, c'est le vétérinaire qui nous dit si on doit en faire un ou pas, mais c'est surtout préconisé dans le cas où ce sont des poulets sans antibio, des poulets certifiés BIO, les dindes BIO. Quand on a une autopsie avec des lésions infectieuses et qu'on fait une bactériologie, on va faire un phytogramme plutôt qu'un antibiogramme. Cela permet de valider la prescription qui va être faite derrière. Les aromatogrammes sont plus réalisés au niveau « étude », pour l'élaboration d'un nouveau produit, par exemple. Le vétérinaire va alors me demander de faire plusieurs essais à partir d'huiles essentielles, et en fonction des résultats obtenus il va choisir celles qui sont le plus appropriées pour incorporer dans son mélange.

On utilise la méthode des disques pour les aromatogrammes, pour les phytogrammes ce sera plutôt la méthode des puits.

Quel milieu de culture utilisez-vous pour la réalisation de ces tests bactériologiques ?

En principe on utilise le GMH (Gélose Mueller-Hinton), soit ordinaire soit supplémenté de sang suivant les bactéries qu'on va tester.

On met 5 uL seulement, d'huiles essentielles pures, qu'on met directement sur le disque. Après on a fait plusieurs essais en testant 10, 5, 3 uL. Comme ces aromatogrammes là consistent plutôt en des études, c'est le vétérinaire qui va nous orienter sur la marche à suivre. On pourra donc être amené à utiliser différentes concentrations, et après on ajuste. On ne peut pas mettre plus de 10 uL sur notre disque parce qu'après il va être vite noyé.

Non, quand on utilise les Huiles Essentielles pures sur buvard on n'a pas forcément besoin de dispersant. Ça marche très bien même sur milieu solide. Pour ce qui est des phytogrammes, il s'agit déjà de mélanges d'huiles essentielles avec des dispersants, donc c'est pareil on n'a pas forcément besoin d'en rajouter pour faire nos phytogrammes.

Est-ce que vous avez beaucoup de demandes en terme de phytogramme et d'aromatogrammes ?

Ça dépend ce que vous entendez par beaucoup. On n'en fait pas forcément tous les jours, après tout dépend des autopsies qu'on reçoit, c'est très variable.

ANNEXE II : RETRANSCRIPTION D'UN ENTRETIEN AVEC
MONSIEUR GRAS PIERRE ALAIN, PHARMACIEN-BIOLOGISTE
FAMH ET RESPONSABLE SCIENTIFIQUE ET SPECIALISTE EN
MICROBIOLOGIE CHEZ BACTOLAB A LAUSANNE, SUISSE, LE 7
MAI 2021

J'ai vu que vous réalisiez des aromatogramme au sein de votre laboratoire et j'aimerais pouvoir vous poser des questions à ce propos. Je travaille plutôt sur leur utilisation en science vétérinaire, mais bien que votre laboratoire est centré sur la médecine humaine je pense que ce sont deux domaines semblables.

C'est intéressant car vous n'êtes pas la première à me le demander, j'ai une personne d'origine allemande qui fait une thèse dans une université vétérinaire Suisse, et on a eu un vétérinaire français qui est venu se former trois jours ici pour faire lui-même des aromatogrammes dans le sud de la France, donc on voit que c'est quelque chose qui commence à prendre de l'ampleur dans le domaine vétérinaire. On sait maintenant que les résistances aux antibiotiques ne sont pas dues qu'à la médecine humaine mais que la médecine vétérinaire a joué un grand rôle là dedans. Les vétérinaires à une époque ont utilisé à tour de bras des antibiotiques, qui se sont retrouvés après dans la terre. Les bactéries les ont retrouvé ensuite dans la terre, plus facilement, d'où le départ de d'autres résistances. On pense que les vétérinaires ont joué un grand rôle. Je pense que maintenant ils y sont sensibles et ils essayent de trouver d'autres solutions, c'est bien.

Et sinon dans quelles indications utilisez-vous les aromatogrammes généralement ?

Alors nous on fait principalement en médecine humaine, on a quelques demandes en vétérinaire, très très rares. D'abord il faut trouver une bactérie pour faire un aromatogramme, comme pour un antibiogramme, donc on a nous principalement des urines de femmes qui font des infections à répétitions, et qui en ont marre de prendre des antibiotiques et donc demandent à leur médecin de faire des aromatogramme. Ensuite on a différent frottis, des frottis vaginals, frottis de plaies, frottis de nez, etc... On peut avoir les selles aussi mais c'est beaucoup plus rare car dans ce cas avec le microbiote ce sont des milliards de bactéries qui sont analysées donc on ne fait pas d'antibiogramme ou d'aromatogramme dessus, on prend plutôt des probiotiques pour corriger.

Et quels protocoles utilisez-vous dans la réalisation des aromatogrammes ? Comme il n'existe pas de protocole normalisé il est difficile de s'y retrouver.

Absolument. Alors nous on utilise une technique qui a été mise au point il y a plus de 25 ans par le docteur Roussianos qui a mis au point la technique. Vous avez raison, c'est une technique qui n'est pas normalisée, on trouve 2, 3 choses sur internet mais il n'y a pas grand-chose c'est vrai. Nous pour cette technique on utilise le même papier buvard qui est utilisé pour les antibiotiques sauf que nous mettons directement la goutte de l'huile essentielle qu'on va tester. On en teste environ une vingtaine, et on pose la goutte sur le disque. Quand on a la bactérie qui a poussé, vous l'isolez, après vous la recoulez sur une gélose, sur laquelle on pose ensuite nos disques de papier buvard et dessus on met une goutte d'huile essentielle. On calibre ça : on met 10 uL, mais c'est quelque chose qui reste « fait-maison » on va dire. Nous on fait ça depuis des années, et ça marche très bien. Ensuite on rend 0, 1 croix, 2 croix, 3 croix. 0 ça veut dire que cela ne marche pas du tout que l'huile essentielle n'est pas adaptée à ce type de germes dans ce contexte. 1 croix c'est bien mais c'est pas sûr que ça fonctionne. 2 croix, 3 croix, c'est que ça fonctionne très bien, et alors le médecin ou le vétérinaire peut prescrire cette huile essentielle, avec les risques que vous connaissez. En effet les huiles essentielles peuvent être dangereuses. Nous on utilise une vingtaine d'huiles essentielles.

Comme pour les antibiogramme, par exemple un Mueller-Hinton, ou une gélose au sang pour certaines germes. L'essentiel c'est que le germe pousse, donc on prend les mêmes géloses qui potentialisent la croissance du germe, après l'huile essentielle ou l'antibiotique va diffuser de la même façon, pour inhiber la croissance ou pas.

Niveau utilisation/prescription des huiles essentielles, comment sont-elles utilisées ?

Alors elles sont utilisées principalement par voie orale, sauf s'il y a des plaies et qu'il faut alors appliquer. Par voie orale il faut faire attention, les huiles essentielles peuvent-être très toxiques. Il faut passer par un pharmacien qui connaît bien les huiles essentielles. Souvent ce qui est intéressant ce sont les mélanges de 3 huiles essentielles qui fonctionnent bien, principalement à 3 croix si possible, 2 croix sinon. Ensuite on fait un mélange, qu'on utilise effectivement par voie orale. Je pense que pour les animaux ce serait la même chose. Il faut juste calculer en fonction du poids, et pour ça il faut voir avec des pharmaciens vétérinaires ou médecins vétérinaires peut-être qui savent ce qu'ils peuvent donner. Il faut faire particulièrement attention pour les animaux qui ne pèsent pas grand-chose, il ne faut pas leur donner la même quantité qu'à un animal plus lourd.

Est-ce que vous avez beaucoup de demandes en terme d'aromatogramme, et quelle est la tendance sur ces dernières années ?

Oui ça a tendance à monter, on en fait à peu près un dizaine par semaine on n'en fait pas beaucoup car nous sommes un laboratoire de taille assez petite. Ça a tendance à monter parce qu'on en parle, parce qu'on a une grande expérience là dedans. Il y a des gens qui nous trouvent sur internet parce qu'ils en ont marre des antibiotiques, des patients qui font pression sur leur médecin parce qu'ils se bourrent d'antibiotiques et finissent par en avoir marre. On parle nous même on fait un peu de promotion. En Suisse on a le droit d'aller parler aux médecins, de leur expliquer que l'on fait des aromatogrammes. Maintenant on a généralement plus de gynécologues qui s'y intéressent, alors qu'avant c'était plutôt des médecins « exotiques » qui s'intéressent aux médecines alternatives et pas seulement à la médecine conventionnelle. On peut avoir aussi des nutritionnistes qui demandent également. Maintenant il y a pas mal de généralistes qui s'intérèssent à ça. Le problème ce que s'ils n'ont pas eu de formation là-dessus pendant leurs études ils ont tendance à oublier ou à ne pas connaître donc c'est aussi à nous d'en parler. Vous aurez le même problème chez les vétérinaires. C'est pour cela qu'il faut en parler. Je pense que c'est une question de temps, nous ça fait 25 ans qu'on les fait mais ce n'est pas quelque chose qui explose non plus. Ça monte tranquillement. En tout cas je ne peux que vous encourager dans votre étude, vous verrez que c'est très intéressant. Et effectivement on ne peut pas se baser sur des choses très normalisées, très calibrées, mais vous allez avec l'expérience acquérir un certain savoir qui vous permettra de les faire comme il faut. Il faut simplement essayer de le faire avec une bonne répétabilité.

Il ne faut pas non plus rejeter l'antibiogramme car on peut se baser là-dessus. Ils sont beaucoup plus calibrés, on sait exactement comment les faire et les produits dessus sont également calibrés alors que les huiles essentielles ne le sont pas. On avait à un moment donné décidé de faire comme les antibiogramme, au lieu des indices de croix de mettre « sensible », « résistant » et « intermédiaire ». On s'est ensuite aperçu que ce n'était peut-être pas intéressant de faire la même chose que l'antibiogramme à ce point dans le sens où mettre des croix c'était mieux, cela laisse un plus grand choix. On mesure cela avec le diamètre d'inhibition.

ANNEXE III : RETRANSCRIPTION D'UNE INTERVIEW AVEC UNE TECHNICIENNE DE LABORATOIRE CHEZ VEBIO A ARCUEIL, FRANCE, LE 7 MAI 2021

Ce sont plutôt les vétérinaires qui décident si ils veulent faire ou pas un aromatogramme, en général ce sont sur des germes qui sont plutôt résistants aux antibiotiques, ou sinon ceux qui veulent faire de l'aromatothérapie pour éviter l'utilisation d'antibiotique.

Quelles protocole suivez-vous pour la réalisation de ces aromatogramme, étant donné qu'il n'existe actuellement pas de protocole normalisé ?

Effectivement il n'y a pas de protocoles réellement normalisé. On a des huiles essentielles, on en met une goutte sur un disque non imprégné sur une gélose, soit une gélose au sang soit une gélose classique.

Nous on met 10 uL généralement, mais des fois c'est un peu trop donc ça peut arriver qu'on en mette un peu moins.

Est-ce que vous avez beaucoup de demandes d'aromatogrammes ? Quelle est la tendance sur ces dernières années ?

Alors ça va ça vient. Parfois on a des mois où on en a 4, et pendant d'autres périodes de l'année on en aura aucun. Parfois on ressent l'impact d'un article qui a été paru sur l'aromatogramme, et du coup il y a pleins de véto qui se disent qu'ils aimeraient utiliser l'aromatogramme, et puis après ça passe. Là ça fait un moment qu'on n'en a pas eu.

Zone d'inhibition (mm)	Rendu des résultats	Compte rendu
<9	Pas d'activité	0
9-11	Sensible	+
>11	Très Sensible	++

ANNEXE IV : PROTOCOLE DE REALISATION
D'AROMATOGRAMME DE BACTOLAB, LABORATOIRE
SPECIALISE EN MICROBIOLOGIE, PAR LELOUP A., DELACRETAZ

D. ET APPROUVE PAR TAILLENS S.

	MOS Aromathérapie 5.5.2.41 : Aromatogramme		Analytique
Version : 1
Créé le 29.03.2017 V1 par Audrey Leloup		Approuvé le 29.03.2017 par Suzanne Taillens
Modifié le 10.03.2020 par Dominique Delacrétaz

Développement d'une technologie en bactériologie : l'aromatogramme

ANNEXES

D. ET APPROUVE PAR TAILLENS S.