1.3.3.
METHODES DE LABORATOIRE
1.3.3.1. Technique de récolte du sérum
Après rétraction du caillot, les
échantillons sont centrifugés à 3500 tours/mn pendant 10
minutes. Les sérums sont recueillis dans de petits tubes en plastique
(Cryotubes), identifiés puis conservés dans un
congélateur.
1.3.3.2. Méthode d'analyse sérologique
1.3.3.2.1 Définition - Principe
Le test ELISA (Enzyme Linked ImmunoSorbend Assay) a
été utilisé pour le titrage des anticorps.
Le test ELISA est une technique de dosage immuno-enzymatique
basée sur la réaction entre un antigène et son anticorps
spécifique et quantifiée par l'intermédiaire d'une
réaction enzymatique. Il existe plusieurs types de tests ELISA (ELISA
direct, ELISA indirect, ELISA sandwisch, ELISA compétition).
Nous avons utilisé ELISA indirect dont le principe est
le suivant :
Des antigènes connus et immobilisés sur une
phase solide en matière plastique sont mis en incubation avec des
anticorps correspondants présents dans les sérums à
tester. Il se forme un complexe antigène-anticorps. L'excès
d'anticorps n'ayant pas réagi est éliminé par lavage.
Le système antigène-anticorps-conjugué
porteur d'une enzyme en présence de son substrat spécifique va
provoquer une réaction colorée dont l'intensité est
proportionnelle à la quantité d'enzyme et donc à la
quantité du système antigène-anticorps-conjugué.
L'intensité de la réaction colorée est
donnée sous forme de densité optique (DO) par un lecteur de
plaque ELISA.
Pour la transformation de la densité optique (DO) du
titre en anticorps nous avons utilisé le logiciel KC junior.
Nous avons utilisé le kit CIVTEST AVI IBD (LABORATORIOS
HIPRA, 2007), le détail technique se trouve en annexe n°4.
1.3.4.
ANALYSES STATISTIQUES
Les données récoltées ont
été saisies et traitées par le tableur EXCEL
de Microsoft et le logiciel EPI-INFO.
1.3.5.
INTERPRETATIONS DE RESULTATS
Le sérum est positif si son titre en anticorps est
supérieur à 357, il est négatif si son titre est
inférieur à 268.
Les sérums dont les titres sont très
élevés, ont été retirés et dilués
à nouveau.
Notre travail effectué selon le plan
étalé précédemment nous a donné des
résultats qui seront présentés dans le chapitre
suivant.
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