2.1.3.2 Réactif
- Sulfate de sodium (   )
2.1.4 Matériel et
réactifs pour la caractérisation physico-chimique de l'huile
essentielle
2.1.4.1 Matériel
- pH-mètre,
- Balance analytique,
- Refractomètre,
- Burette graduée,
- Ballon de 250 ml,
- Réfrigérant, et
- Bain marie.
2.1.4.2 Réactifs
- Acide chlorhydrique,
- Ethanol à 99 %,
- Phénolphtaléine, et
- Potasse alcoolique.
2.2 Méthodes
2.2.1 Caractérisation
des feuilles d'Eucalyptus
a) Taux d'humidité
La teneur en eau est déterminée par dessiccation
d'un échantillon de 3 g à la température de 105 °C
dans une étuve pendant 24 heures. Le taux d'humidité est
défini comme étant la perte de poids subie lors de la
dessiccation.
La détermination de la teneur en eau était faite
par le calcul de la différence de poids avant et après la
dessiccation selon l'équation 2.1 :
Avec :
% H : Taux d'humidité,
M0 : Poids de la capsule vide,
M1 : Poids de la capsule + échantillon
avant dessiccation, et
M2 : Poids de la capsule + échantillon
après dessiccation.
b) Teneur en cendre
Le principe a consisté en une minéralisation par
calcination de l'échantillon à 600 °C dans un four à
moufle pendant 5 heures. La perte de masse par combustion correspond à
la quantité de la matière organique (Audige, 1978).
La détermination de la teneur en matière
organique a été faite par le calcul de la différence de
poids avant et après la carbonisation. La teneur en matière
organique a été donnée par l'équation 2.2
Avec :
% Cendre : Teneur en matière organique,
M0 : Masse en gramme de la capsule vide,
M1 : Poids de la capsule et de
l'échantillon avant incinération, et
M2 : Poids de la capsule et de
l'échantillon après incinération.
2.2.1.1 Analyse
phytochimique
Avant de mettre en évidence les principes actifs se
trouvant au sein de la plante d'Eucalyptus, les extraits aqueux et
Méthanolique ont été préparés pour les tests
ultérieurs :
a) extrait aqueux : 50 g de matériel
végétal ont été mis en contact avec 300 ml d'eau
dans un ballon monocol surmonté d'un réfrigérant.
L'ensemble a été porté à reflux pendant une heure.
Le mélange a été filtré et l'extrait aqueux a
été soumis aux différents tests.
b) extrait Méthanolique : La plante
pulvérisée en poudre (50 g), a subi une macération dans un
mélange des solvants : Méthanol /   80/20 (v/v) pendant 24 heures, puis on a filtré et ensuite on a
recueilli le filtrat en suite on répète une seconde fois ce
procédé. Les diverses fractions récupérées
ont été réunies et évaporées sous pression
réduite sur le rotavapeur à une température de 40
°C.
La mise en évidence des principes actifs, a
consisté à la détection des flavonoïdes, tanins,
stéroles, composés réducteurs, amidon, saponosides, au
sein de l'échantillon d'Eucalyptus.
1. Flavonoïdes
La méthode de Utshudi et al., (2003) a été
utilisée pour détecter les flavonoïdes présentes dans
l'échantillon d'Eucalyptus. La réaction de
détection des flavonoïdes a consisté à traiter 5 ml
de l'extrait éthanolique avec 1 ml d'HCl concentré et 0,5 g de
tournure (ou copeau) de magnésium. La présence des
flavonoïdes a été mise en évidence avec l'apparition
d'une couleur rose ou rouge se développe après 3 minutes.
Le changement de coloration :
· Virage au rouge (flavanones)
· Virage au rouge pourpre (flavonols)
· Rouge violacée (flavanones et flavonols)
2. Tanins
La présence des tanins est mise en évidence en
ajoutant, à 1 ml de l'extrait éthanolique 2 ml d'eau et 2
à 3 gouttes de solution de   diluée. Un test positif est révélé par
l'apparition d'une coloration bleue-noire (tanins galliques), vert ou
bleue-verte (tanins catéchiques). (Karumi et coll, 2004).
Stérols et stéroïdes
On a évaporé 2,5 ml d'extrait alcoolique, puis
traiter le résidu obtenu avec 2,5 ml de Chloroforme anhydre. Ensuite on
a mélangé 1,25 ml de la solution chloroformique avec 1,25 ml
d'anhydre acétique et on y a ajouté quelques gouttes d'acide
sulfurique concentré, ce mélange a été agité
puis Laisser au repos, l'apparition d'une coloration violacée a
été l'indicateur de la présence de stérols (Amini
et al., 2010).
4. Composés réducteurs
Leur détection a consisté à traiter 1 ml
de l'extrait éthanolique avec 2 ml d'eau distillée et 10 gouttes
de la liqueur de Fehling, puis chauffer le mélange. Un test positif est
révélé par la formation d'un précipité rouge
brique (Dohou, 2015).
5. Amidon
On a Chauffé 5 ml de l'extrait aqueux avec 10 ml d'une
solution de NaCl saturée dans un bain marie jusqu'à
l'ébullition ; on y ajouter le réactif d'amidon eau iodée
ou lugol. L'apparition d'une coloration bleue violacée a
été l'indicateur la présence de l'amidon (Senhaji et al.,
2005).
6. Saponosides
Les saponosides sont caractérisés par un
l'indice de mousse. Leur détection est réalisée en
ajoutant un peu d'eau à 2 ml de l'extrait aqueux, après
l'agitation, le mélange est abandonné pendant 20 minutes et la
teneur en saponosides est évaluée (Bruneton, 2009) :
· Apparition de la mousse = test positif
· Pas de mousse = test négatif
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