Cytotoxicité larvaire et activités antimicrobiennes des extraits de Adansonia digitata L., Tamarindus indica L. et de Acacia nilotica L. delile sur des souches microbiennes multirésistantes au Bénin

2.2.2. Matériel biologique

Les souches bactériennesmultirésistantes isolées des échantillons de l'environnement hospitalier et communautaire ont été prises dans la souchethèque de URMAPha. Il s'agit des souches de : Klebsiella pneumoniae, Klebsiella oxytoca, Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Staphylococcus aureus, Staphylococcus Coagulase Négative résistanteset des souches de référence de Escherichia coli ATC5922 et S. aureus ATC5922. Les souches bactériennes utilisées provenaient de la souchethèque du Laboratoire de l'Unité de Recherche en Microbiologie appliquée et Pharmacologie des substances naturelles (U.R.M.A.Pha). Le critère de choix des souches a été basé sur deux aspects à savoir : l'espèce et la présence des gènes de résistance. Les espèces bactériennes choisies sont les plus prédominantes dans les cas d'infection clinique '(Akouétévi et al., 2017). Quant aux gènes de résistance, d'après Ugbo et al. (2020), les gènes Bla_SHV?; Bla_CTX (M1, M2, M9, M15) sont les plus rencontrés d'après les récentes études sur l'émergence de la résistance aux antibiotiques en Afrique. Ainsi, chaque souche bactérienne choisie a présenté deux à trois gènes de résistance. Pour les bacilles à Gram négatif, deux types de résistance ont été considérés à savoir : la résistance aux BLSE et carbapénème (Duval et al., 2009?; Isendahl et al., 2012). Quant aux Cocci Gram positifs, le gène mecA a été considéré pour Staphylococcus aureusrésistant à la Méticilline (SARM) et Staphylococcus à Coagulase Négative résistantes (SCN), car elles ont demeuré être une cause majeure des infections nosocomiales et communautaires -(Masim et al., 2021). Le tableau VII si dessous présente le profil de résistance des souches bactériennes multirésistantes utilisées. Quant au tableau VIII, il présente le profil des gènes de résistance des souches bactériennes multirésistantes.

Tableau VI : Profil de résistance des souches bactériennes multirésistantes

Souches bactériennes	Profil de résistance
K. pneumoniae	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^I IPM^S ETP^S GEN^R CIP^R
	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^R IPM^S ETP^S GEN^R CIP^R
K. oxytoca	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^R IPM^S ETP^S GEN^R CIP^R
	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^R IPM^S ETP^R GEN^R CIP^R
E. cloacae	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^R IPM^S ETP^S GEN^R CIP^R
	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^R IPM^S ETP^S GEN^R CIP^R
E. coli	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^S IPM^S ETP^R GEN^R CIP^R
	AMC^R AMX^R CTX^R CTR^R ATZ^R IPM^S ETP^S GEN^R CIP^R
S. aureus	K^S CN^S CIP^S CT^S NA^R TOB^S E^S S^S
	K^R CN^I CIP^S CT^R NA^R TOB^S E^R S^S
SCN	K^S CN^S CIP^S CT^R NA^S TOB^S E^R S^S
	K^R CN^R CIP^R CT^R NA^R TOB^I E^R S^S

Légende :^S : Sensible, ^R : Résistant, AMC : Amoxiclave, AMX : Amoxicilline, CTX : Ceftriaxone, CTR : Cotrimoxazole, ATZ : Aztréonam, IPM : Imipénème, ETP : Ertapénème, GEN : Gentamicine, CIP : Ciprofloxacine, K : Kanamycine, CN?; CIP : Ciprofloxacine; NA : Acide Nalidixique?; TOB : Tobramycine?; E : Erythromycine, S : Streptomycine.

Tableau VII : Profil des gènes de résistance des souches bactériennes multirésistantes

Souches bactériennes	BlaSHV	BlaCTXM1	BlaCTXM2	BlaCTXM9	BlaCTXM15
K. pneumoniae	+	-	+	-	-
	+	-	+	+	+
K. oxytoca	+	+	+	-	-
	+	-	+	-	-
E. cloacae	-	+	-	+	+
	+	+	+	-	+
E. coli	+	-	+	+	+
	-	-	+	+	+

L'activité antifongique a été effectuée sur des souches cliniques isolées des échantillons de sécrétions vaginalessélectionnéesdans la souchethèque del'unité : C. albicans sensible et mulltirésistante?; C. glabrata sensible et mulltirésistante?; C. parapsilosis sensible et mulltirésistante, C. krusei sensible et mulltirésistante et une souche de référence de C. albicans.Ces souches provenaient de la souchetèque de l'Unité de Recherche en Microbiologie appliquée et Pharmacologie des substances naturelles (U.R.M.A.Pha). Les critères de choix des souches ont été basés sur deux aspects à savoir : l'espèce et la résistance aux antifongiques. Les espèces fongiques choisies ont été celles majoritaires au cours des infections cervicovaginales d'après une récente étude réalisée en 2020 ayant porté sur les profils eìpideìmiologique et microbiologique des candidoses vulvovaginales diagnostiqueìes chez les femmes reçues en consultation gynécologique aÌ l'Hôpital de Menontin'(Montégro, 2021). Quant au choix de la résistance, les souches ayant présenté au moins une des résistances antifongiques les plus fréquentes (Amphotéricine B et Fluconazole) (Hmida et al., 2018?; Wang et al.,2019) ont été considérées. Les facteurs de virulences de ces souches ont également été déterminés et présentés dans le tableau XI.Les interprétations des mesures de diamètre d'inhibition ont été effectuées selon la grille ci-dessous (Tableau IX) '(Bonouman-Ira et al., 2011?; Khan et al., 2018). Le profil de résistance des souches est présenté dans le Tableau X ci-dessous.

Tableau VIII : Interprétation des mesures de diamètre d'inhibition

Antifongiques	Concentration des disques (mg)	Zone d'activité (mm)
		Sensible	Intermédiaire/SDD	Résistante
Nystatine	100	=15	10-14	=10
Fluconazole	100	= 20	10-19	= 10
Amphotéricine B	50	>10	=10	< 10
Clotrimazole	10	= 20	10-19	= 10
Kétoconazole	10	= 20	10-19	= 10
Itraconazole	10	= 20	10-19	= 10

Tableau IX : Profil des souches fongiques utilisées

Souches antifongiques	Profilde résistance
C. albicans S	ITR^SNYS^S FLU^SAmB^SCLT^SKET^S
C. albicans R	ITR^SNYS^S FLU^RAmB^RCLT^SKET^S
C. glabrata S	ITR^SNYS^S FLU^SAmB^SCLT^SKET^S
C. glabrata R	ITR^SNYS^S FLU^RAmB^RCLT^SKET^S
C. parapsilosiss S	ITR^SNYS^S FLU^SAmB^SCLT^SKET^S
C. parapsilosisR	ITR^SNYS^S FLU^RAmB^SCLT^RKET^S
C. krusei S	ITR^SNYS^S FLU^SAmB^SCLT^SKET^S
C. krusei R	ITR^S NYS^S FLU^RAmB^SCLT^RKET^S

Légende :Fluconazole (FLU); Amphoteìricine B (AmB); Keìtoconazole (KET)?; Clotrimazole (CLT)?; Itraconazole (ITR), Nystatine (NYS), Résistant (R), Sensible (S).

Tableau X : Facteurs de virulence des souches fongiques

	Hémolysine	Lécithinase	Adhésion	Hydrophobicité	Biofilm	Exo polysaccharide	Gélatinase
C. krusei R	+	+	+	+	+	-	-
C. krusei (S)	+	+	+	+	+	-	-
C. albicans R	+	-	+	+	-	-	-
C. albicans (S)	+	+	+	+	+	-	-
C. glabrata R	+	+	+	+	+	-	-
C. glabrata (S)	+	-	+	+	+	+	-
C. parapsilosis R	-	-	+	+	-	-	+
C. parapsilosis (S)	-	+	-	+	+	-	-

Légende : + : Présence?; - : absence