B- ELECTROPHORESE D'HEMOGLOBINE
Ce test est conseillé après réalisation d'un
test d'Emmel au résultat négatif comme test de confirmation. Il
est le plus souvent demandé aux couples d'individus avant leur mariage
afin de prévoir les risques d'obtention des enfants
drépanocytaires.
1- Matériels
Les matériels nécessaires sont les suivants :
- Des échantillons de sang prélevés dans un
tube à EDTA (anticoagulant) - Des pipettes pasteur et une cuve d'eau
pour les nettoyer
- Deux cuves contenant pour la première de l'eau
physiologique (100 ml) et pour la solution du tampon tris (100 ul)
- Des échantillons de contrôle
- Des tubes à essais - Eau
- Un électrophorégramme constitué d'une
borne négative et une borne positive et équipé d'un
portoir sur lequel sont fixés les papiers cellulose et un couvercle de
couleur sombre pour empêcher le passage des rayons solaires.
- Du papier cellulose - Eau physiologique
- Une micropipette avec embouts - Tampon tris
2- Principe
Il est basé sur la détermination de la nature
des hémoglobines à partir de leur différence de
polarité. Les échantillons d'hémoglobines sont
prélevés et déposés sur papier cellulose
à
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 10
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
coté d'un échantillon de nature connu
(contrôle). Une fois dans l'électrophorégramme, les
molécules d'hémoglobine chargées toutes
négativement migrent vers les électrodes positives;
l'hémoglobine A de faible polarité migre plus
vite que l'hémoglobine S.
3- Mode opératoire
Cet examen se réalise en deux étapes : la
première consiste à la recherche de l'hémoglobine et la
seconde à l'électrophorèse proprement dit.
*Recherche d'hémoglobine : elle fait
ressortir le phénomène de turgescence et se fait comme suit :
- prélever à l'aide d'une
pipette pasteur un échantillon de sang,
- introduire cet échantillon dans un tube contenant de
l'eau et laisser le temps aux hématies d'absorber de l'eau,
- fermer le tube et bien
homogénéiser. Cette action permet de faire éclater les
hématies qui libèrent des molécules d'hémoglobine
à analyser.
*Electrophorèse proprement dite : elle
se fait comme suit :
- introduire le papier cellulose dans de l'eau physiologique ;
enlever et faire sécher avec papier absorbant,
- charger 10 ul des échantillons d'hémoglobine
dans les puits, prélever avec le peigne électrophorétique
et placer sur le papier cellulose de l'extrémité gauche vers
extrémité droite en commençant par le contrôle,
- Après avoir introduit 100 ul de tampon tris dans
chaque partie, fixer le papier cellulose sur le portoir et déposer dans
l'appareil de telle sorte que les échantillons soient à
l'électrode négative,
- bien fermer l'appareil pour éviter la
traversée des rayons solaires,
- laisser migrer pendant 45minutes et interpréter les
résultats obtenus,
- après lecture des résultats à l'aide
d'une pince, tremper le papier cellulose dans l'eau physiologique question de
le nettoyer pour une prochaine utilisation et le conserver dans le tampon
tris.
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