|
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
MINISTERE DE LA SANTE PUBLIQUE
************
DELEGATION REGIONALE DE L'OUEST
************
|
HOPITAL DE DISTRICT DE DSCHANG
************
|
|
REPUBLIQUE DU CAMEROUN
Paix
-Travail-Patrie
********
UNIVERSITE DE
DSCHANG
*************
FACULTE DES SCIENCES
***********
DEPARTEMENT
DE BIOCHIMIE
*************
METHODES DE DIAGNOSTIC DES MALADIES
PARASITAIRES
DANS LE LABORATOIRE DE L'HOPITAL DE
DISTRICT DE DSCHANG
Rapport de stage académique effectué du
01Juillet au 30 aout 2013 à l'Hôpital de District de
Dschang
Par :
GOMSEU DJOUMSIE Emmanuel Boris
Matricule : CM04-09SCI1597
Biochimie Clinique MASTER
I
|
Sous la Direction de :
|
et
|
La supervision académique de :
|
Année académique 2012-2013
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris
Mme KAMNANG HORTENSE M. NJATENG GUY SEDAR
TECHNICIEN MEDICO-SANITAIRE SINGOR
ENSEIGNANT-CHERCHEUR
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
TABLE DES MATIERES
DEDICACE i
REMERCIEMENTS ii
LISTE DES ABREVIATIONS iii
LISTE DES FIGURES iv
LISTE DES TABLEAUX v
INTRODUCTION GENERALE 1
PREMIERE PARTIE : PRESENTATION GENERALE, OBJECTIFS ET
DEROULEMENT
DU STAGE 2
I- PRESENTATION DU CADRE DE STAGE 3
A- SITUATION GEOGRAPHIQUE 3
B- ORGANISATION FONCTIONNELLE 3
II- PRESENTATION DU LABORATOIRE 4
A- LOCALISATION 5
B- ORGANISATION 5
III- OBJECTIFS DU STAGE OPERATIONNELS ET DEROULEMENT DU STAGE
5
A- OBJECTIFS DU STAGE 5
B- DEROULEMENT DU STAGE 6
DEUXIEME PARTIE : 7
METHODES DE DIAGNOSTIQUE DES MALADIES 7
I- EXAMENS HEMATOLOGIQUES 8
A- NUMERATIONS FORMULAIRE SANGUINE 8
B- ELECTROPHORESE D'HEMOGLOBINE 9
C- GROUPE SANGUIN ET FACTEUR RHESUS 11
D- VITESSE DE SEDIMENTATION 12
E- TAUX DE CD4/CD8 13
II- EXAMENS DES PARAMETRES BIOCHIMIQUES ET DOSAGE
ENZYMATIQUES 14
A-EXAMENS DES PARAMETRES BIOCHIMIQUES 14
B-DOSAGE DE QUELQUES ENZYMES (LES TRANSAMINASES) 16
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
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de Dschang.
III- EXAMEN BACTERIOLOGIQUE 17
A-PRELEVEMENT CERVICO-VAGINAL (PCV) 17
B-PRELEVEMENT URETRAL 19
C-EXAMEN DE CRACHAT : RECHERCHE DES BAAR 20
D- CULOT URINAIRE OU ECBU 22
IV-LA SEROLOGIE 23
A-TESTS DE SEROLOGIE HIV 23
B- TEST DE CHLAMYDIA IG 24
TROISIEME PARTIE : 25
METHODES DE DIAGNOSTIC DES MALADIES PARASITAIRES 25
I-LE PALUDISME 26
A-LA GOUTTE EPAISSE 26
B-FROTTIS SANGUIN 27
II- DYSENTERIE AMIBIENNE 28
A-EXAMEN MACROSCOPIQUE DES SELLES 29
B-EXAMEN MICROSCOPIQUE DES SELLES 29
III- STATISTIQUE ET INTERPRETATION DES RESULTATS
30
QUATRIEME PARTIE : DISCUSSION, CONCLUSION, RECOMMANDATION,
PERPECTIVES ET PROBLEME POUVANT FAIRE L'OBJET D'UNE RECHERCHE
33
DISCUSSION 34
CONCLUSION 35
RECOMMANDATION ET PERPECTIVES 36
PROBLEME POUVANT FAIRE L'OBJET D'UNE RECHERCHE 36
REFERENCES 37
ANNEXE 1 38
ANNEXE 2 39
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris i
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
DEDICACE
de Dschang.
Je dédie ce rapport à :
? Mon encadreur académique M. NJATENG GUI SEDAR SINGOR ?
Mon père DJOUMSIE PIERRE
? Ma mère NZOGANG CHRISTINE
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Emmanuel Boris ii
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
REMERCIEMENTS
Mes remerciements vont :
> Premièrement au divin souteneur le Seigneur
Jésus qui ; jusqu'ici nous garde et nous préserve des risques de
contamination rencontrés dans un laboratoire d'analyse
biomédical.
> A notre chef de département le professeur KUIATE
Jules Roger pour son orientation. > Au Directeur de l'hôpital qui nous
a reçus sans distinction.
> Au surveillant général Madame TAAFO Blandine
Chantal qui ne cesse de nous prédiquer des conseils dans les domaines
sanitaire et social.
> Au responsable du laboratoire Madame KAMNANG Hortense qui
nous a accompagnés tout au long de cette expérience
professionnelle avec beaucoup de patience et de pédagogie.
> Au responsable du laboratoire de bactériologie M.NDAM
pour les explications de certains paramètres.
> A tout le personnel du laboratoire pour leur soutien et leur
assistance durant les travaux d'apprentissage.
> A notre coordonnateur de niveau Dr TELEFO. P B pour
l'attention qu'il nous réserve. > A tout les enseignants du
département de Biochimie pour leur encadrement à
l'Université.
> A nos sociables camarades avec qui nous avons fait ce stage
et travaillé de manier solidaire.
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris iii
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
LISTE DES ABREVIATIONS
PU : Prélèvement
urétral
PCV : prélèvement
Cervico-Vaginal
GE : Goutte Epaisse
ECBU : Examen Cytobactériologique de
l'Urine
BAAR : Bacille
Acido-Alcoolo-Résistant
GS : Groupe Sanguin
TW : Test de Widal
SGPT : Sérum Glutamate Pyruvate
Transférase
SGOT ; Sérum Glutamate Oxaloacetate
Transférase
AST : Aspartate Transaminase
ALT : Alanine Transaminase
NFS : Numération Formule Sanguine
VS : Vitesse de Sédimentation
VDRL: Venerian Diseases Research
Lymphocytes
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Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
LISTE DES FIGURES
Figure 1 : Hôpital de district de
Dschang
Figure 2 : Présentation de l'ordre
hiérarchique
Figure 3 : Laboratoire de l'hôpital de
district de Dschang
Figure 4 : les différentes
possibilités de transfusion sanguine
Figure 5 : Plasmodium falciparum (goutte
épaisse)
Figure 6 : Plasmodium falciparum (frottis
sanguin)
Figure 7 : kystes d'Entamoeba histolytica
vu au microscope Figure 8 : Résultats du diagnostic du
paludisme du mois de juillet Figure 9 : Résultats du
diagnostic du paludisme du mois d'aout Figure 10 :
Résultats du diagnostic du paludisme du mois de juillet Figure
11 : Résultats du diagnostic du paludisme du mois d'aout
Figure 12 : Plan de localisation de l'hôpital de
district de Dschang Figure 13 : Quelques appareils du
laboratoire
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Emmanuel Boris v
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
LISTE DES TABLEAUX
Tableau 1 : Détermination du groupe
sanguin et du facteur rhésus
Tableau 2 : Méthodologie de dosage de la
créatinine Tableau 3 : Méthodologie de dosage de
l'acide urique
Tableau 4 : Mode opératoire du test de
chlamydia
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Emmanuel Boris 1
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
INTRODUCTION GENERALE
La filière biochimie de la faculté de science
enseigne non seulement les constituants chimiques des cellules vivants mais
aussi des différentes relations et modifications qu'elles subissent.
Elle est constituée de trois options différentes, à savoir
les biotechnologies alimentaires, la pharmacologie de la biochimie clinique. Ce
qui nous intéresse ici est la Biochimie clinique qui est une partie de
la biochimie qui s'intéresse à la prescription des examens, au
prélèvement, à l'analyse des échantillons cliniques
et à l'interprétation des résultats. Pour mieux assimiler
ces notions, seule la théorie est insuffisante pour un biochimiste
clinicien. Raison pour laquelle l'instauration d'un stage académique qui
nous permet de mettre en pratique les connaissances théoriques acquises
à l'université. L'implication des hôpitaux et cliniques
dans la lutte contre les maladies rencontrées au sein des populations
est au centre des préoccupations des autorités gouvernementales
en charge de la santé publique avec pour objectif la mise sur pied d'une
politique de sensibilisation afin de mettre en garde les populations face aux
différentes maladies qui minent la société. Par ailleurs,
l'atteinte de cet objectif social dépend de la capacité des
structures sanitaires à maitrisé leur système de gestion
qui doit être flexible et capable de s'adapter à cet environnement
tout en minimisant les couts des examens. Le rapport de stage
rédigé à la suite de nos différentes observations
réaliser sur le terrain a pour préoccupation principale de
répertorier les différents travaux effectués durant notre
séjour au laboratoire. Ainsi pour atteindre ces fins, nous allons
d'abord procéder par une brève présentation du centre dans
lequel nous avons exercé notre stage, en suite nous allons
présenter les différents analyses effectuées pour les
diagnostics des différentes maladies et enfin insisté sur les
méthodes diagnostic de quelques maladies parasitaires à l'instar
du paludisme et de la dysenterie amibienne dans le laboratoire d'analyse de
l'hôpital de district de Dschang.
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
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PREMIERE PARTIE :
PRESENTATION GENERALE,
OBJECTIFS ET DEROULEMENT DU
STAGE
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Emmanuel Boris 2
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Emmanuel Boris 3
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
I- PRESENTATION DU CADRE DE STAGE
Le stage académique s'est déroulé à
l'hôpital de district de Dschang (figure 1) plus
précisément au laboratoire.
Figure 1 : Hôpital de district de
Dschang
A- SITUATION GEOGRAPHIQUE
L'hôpital de district de Dschang est situé dans
la région de l'Ouest Cameroun, Département de la Menoua,
arrondissement de Dschang et situé entre le village Foréké
et le village Foto bien en face à l'entrée de l'université
de Dschang.
B- ORGANISATION FONCTIONNELLE
L'hôpital de district de Dschang est un cadre de soin
bien organisé ; les services très proches ont en commun une
relation étroite. Ainsi, de l'entrée jusqu'au fond, on peut avoir
: l'accueil, l'urgence, l'enregistrement, la consultation, y copris la
pharmacie au centre et au vu de tous, le bloc administratif constitué
respectivement du bureau du directeur, du surveillant général, de
l'économe et du régisseur. Ce service représente le coeur
de l'hôpital. A droite, se trouvent la néonatologie, la
maternité et autres ; derrière, on retrouve la pédiatrie,
la gynécologie, le bloc opératoire, la chirurgie la
médecine homme et femme. Comme autre
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Emmanuel Boris 4
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
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service, nous avons la vaccination, l'UPEC, la stomatologie,
le laboratoire, le haut standing et enfin la morgue. Malgré leur
étroitesse, ces différents services ont un personnel bien
spécialisé ainsi qu'un responsable qui est le major (figure
2).
Médecin chef
Médecin chef adjoint
Surveillant général Chef service des
affaires
Financières
Coordonnateur de soins Chef comptable
Majors de services Comptables
Personnels soignants Tarificateur et caissiers
Agents d'entretien Morguier
Agents de
sécurité
Figure 2 : Présentation de l'ordre
hiérarchique
II- PRESENTATION DU LABORATOIRE
Figure 3 : Laboratoire de l'hôpital de
district de Dschang
Le laboratoire est l'un des services les importants de
l'hôpital. C'est le centre d'intérêt de notre stage (figure
3).
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Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
A- LOCALISATION
Le laboratoire est situé à
l'extrémité gauche de l'hôpital, un peu au fond entre le
servie d'ondostomatologie, la morgue et le haut standing.
B- ORGANISATION
Le laboratoire de district de Dschang est constitué de
trois bâtiments. Le premier bâtiment comporte deux grandes
compartiments à savoir une où se font à l'entrée
l'enregistrement des patients ; à coté, se trouve une petite
salle de prélèvements sanguin, plus loin nous avons le bureau du
major, une salle de prélèvement pour PCV et PU ; une salle de
veille. Au fond de ce compartiment, de la gauche vers la droite, nous avons la
paillasse de prélèvement des échantillons de fèces
et une paillasse d'analyses parasitologiques. Dans le deuxième
compartiment, nous avons deux salles ; la première est constituée
d'une paillasse de sérologie et d'une paillasse de coloration ; la
deuxième est la salle de veille.
Le deuxième bâtiment du laboratoire est
constitué d'une salle de prélèvement pour le PCV et PU;
d'une salle constituée d'une paillasse pour les colorations, d'une autre
pour les analyses bactériologiques et enfin une paillasse
constituée d'un ordinateur pour informatiser les résultats ;
enfin d'une autre salle pour les cultures bactériennes,
réalisation des antibiogrammes...
Le troisième bâtiment du laboratoire est
constitué d'une salle d'analyses biochimiques, d'un
réfrigérateur pour le stockage des réactifs et d'une autre
salle où se font les analyses cytologiques et hématologiques.
III- OBJECTIFS DU STAGE OPERATIONNELS ET DEROULEMENT
DU
STAGE
A- OBJECTIFS DU STAGE
Le stage académique en biochimie clinique permet
à l'étudiant de mettre en pratique les connaissances
théoriques acquises lors des enseignements à l'université.
En effet il est question pour nous :
? De comprendre la pertinence des examens demandés et
l'interprétation des résultats.
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Emmanuel Boris 6
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
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? Capable d'effectuer des diagnostics biologiques et biochimiques
des maladies courantes et surtout d'interpréter les résultats.
? D'effectuer les diagnostics biologiques et biochimiques des
maladies courantes et surtout d'interpréter les résultats.
? D'être capable de déceler les erreurs, les codes
d'erreurs afin de les éviter.
? D'identifier et d'utiliser de manière
indépendante et efficiente les équipements du laboratoire pour
l'analyse spécifique et en fin qu'il y ait acquisition des bases
nécessaires quant à la gestion du laboratoire d'analyses
médicales, déontologique, gestion des prélèvements,
gestion des résultats, gestion administrative et financière.
B- DEROULEMENT DU STAGE
Notre stage à l'hôpital de district de Dschang
s'est déroulé du 01 juillet au 30 aout 2013. Lors de la
première journée il nous a été
présenté par la surveillante générale de
l'hôpital, les règles et conduits à suivre durant notre
stage. Les deux premières semaines ont été pour nous une
phase d'imprégnation durant laquelle nous avons vu comment se faisait
une fois de plus les différentes analyses et colorations, comment
manipuler les appareils et en fin comment se faisait le dosage des
paramètres biochimiques. Les autres semaines étaient
réservées à la pratique des différents dosages et
colorations.
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires
dans le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
METHODES DE DIAGNOSTIQUE DES
MALADIES
DEUXIEME PARTIE :
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
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Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 8
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
I- EXAMENS HEMATOLOGIQUES
A- NUMERATIONS FORMULAIRE SANGUINE
Il y a quelques temps, elle se faisait de façon
séparée c'est-à-dire en plusieurs étapes mais
aujourd'hui, elle devient plus facile grâce à l'utilisation des
automates de numérations qui nous donnent en quelques minutes les
valeurs plus exactes des éléments figurés du sang
c'est-à-dire nombres de globules blancs, de globules rouges, de
plaquettes.
1- Matériels
Les matériels utilisés sont les suivants :
- Une seringue - Un portoir
- Des papiers formats - Eau distillée
- Un tube à anticoagulant EDTA (ethyl diamine
triacétate) - Automate de numération
2- Prélèvement
A l'aide d'une seringue stérile, le sang est
prélevé et introduit dans un tube à EDTA. Les tubes sont
transportés à l'aide d'un portoir vers l'automate.
3- Technique de l'examen
L'automate est équipé d'un clavier
d'enregistrement des informations sur le patient (nom, prénom, et code
de l'échantillon), d'un tube absorbant, d'une imprimante et de deux
bocaux l'un contenant la solution de lavage automatique de l'appareil et
l'autre pour recueillir les déchets du lavage. La procédure est
le suivant :
- le technicien tient de la main gauche l'échantillon
qu'il homogénéise tout doucement en renversant à chaque
fois le tube (un doigt à l'extrémité supérieur et
l'autre à l'extrémité inferieur),
- pendant qu'il homogénéise de la main droite,
il enregistre les informations concernant le patient dans la machine,
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 9
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
- il ouvre le tube et fait absorber une quantité
à la machine à partir du tube absorbant de la machine,
- quelques minutes après la machine donne les
résultats numériques pouvant être imprimés.
B- ELECTROPHORESE D'HEMOGLOBINE
Ce test est conseillé après réalisation d'un
test d'Emmel au résultat négatif comme test de confirmation. Il
est le plus souvent demandé aux couples d'individus avant leur mariage
afin de prévoir les risques d'obtention des enfants
drépanocytaires.
1- Matériels
Les matériels nécessaires sont les suivants :
- Des échantillons de sang prélevés dans un
tube à EDTA (anticoagulant) - Des pipettes pasteur et une cuve d'eau
pour les nettoyer
- Deux cuves contenant pour la première de l'eau
physiologique (100 ml) et pour la solution du tampon tris (100 ul)
- Des échantillons de contrôle
- Des tubes à essais - Eau
- Un électrophorégramme constitué d'une
borne négative et une borne positive et équipé d'un
portoir sur lequel sont fixés les papiers cellulose et un couvercle de
couleur sombre pour empêcher le passage des rayons solaires.
- Du papier cellulose - Eau physiologique
- Une micropipette avec embouts - Tampon tris
2- Principe
Il est basé sur la détermination de la nature
des hémoglobines à partir de leur différence de
polarité. Les échantillons d'hémoglobines sont
prélevés et déposés sur papier cellulose
à
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Emmanuel Boris 10
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
coté d'un échantillon de nature connu
(contrôle). Une fois dans l'électrophorégramme, les
molécules d'hémoglobine chargées toutes
négativement migrent vers les électrodes positives;
l'hémoglobine A de faible polarité migre plus
vite que l'hémoglobine S.
3- Mode opératoire
Cet examen se réalise en deux étapes : la
première consiste à la recherche de l'hémoglobine et la
seconde à l'électrophorèse proprement dit.
*Recherche d'hémoglobine : elle fait
ressortir le phénomène de turgescence et se fait comme suit :
- prélever à l'aide d'une
pipette pasteur un échantillon de sang,
- introduire cet échantillon dans un tube contenant de
l'eau et laisser le temps aux hématies d'absorber de l'eau,
- fermer le tube et bien
homogénéiser. Cette action permet de faire éclater les
hématies qui libèrent des molécules d'hémoglobine
à analyser.
*Electrophorèse proprement dite : elle
se fait comme suit :
- introduire le papier cellulose dans de l'eau physiologique ;
enlever et faire sécher avec papier absorbant,
- charger 10 ul des échantillons d'hémoglobine
dans les puits, prélever avec le peigne électrophorétique
et placer sur le papier cellulose de l'extrémité gauche vers
extrémité droite en commençant par le contrôle,
- Après avoir introduit 100 ul de tampon tris dans
chaque partie, fixer le papier cellulose sur le portoir et déposer dans
l'appareil de telle sorte que les échantillons soient à
l'électrode négative,
- bien fermer l'appareil pour éviter la
traversée des rayons solaires,
- laisser migrer pendant 45minutes et interpréter les
résultats obtenus,
- après lecture des résultats à l'aide
d'une pince, tremper le papier cellulose dans l'eau physiologique question de
le nettoyer pour une prochaine utilisation et le conserver dans le tampon
tris.
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 11
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
C- GROUPE SANGUIN ET FACTEUR RHESUS
Le groupe sanguin et le facteur rhésus sont
déterminés pour toute une vie, car leur valeur ne change pas. Ils
sont donc standards. L'échantillon utilisé pour leur
détermination est le sang prélevé dans un tube contenant
l'EDTA. Le principe de la détermination est basé sur
l'agglutination.
1- Principe et intérêt
Lorsqu'on fait réagir un anticorps avec son
antigène spécifique, il se forme des complexes
antigène-anticorps sous forme d'agglutinations. L'intérêt
de ce groupage est la recherche simultanée et obligatoire des
agglutinines par la méthode de SIMONIN et des agglutinogènes par
la méthode de BETH-VINCENT.
2- Matériels et méthode
Désinfecter le doigt à l'aide du coton
imbibé d'alcool. Avec du vaccinostyle, piquer le bout du doigt et
déposer quatre gouttes de sang sur une plaque en porcelaine.
Déposer sur chacune de ces gouttes de sang respectivement les
antigènes anti A, anti B, anti AB et anti D. Mélanger et
chalouper pendant deux minutes et observer.
3- Résultats et interprétation
La présence d'une agglutination témoigne la
présence dans le milieu des complexes Ag-AC (tableau 1).
Tableau 1 : Détermination du groupe
sanguin et du facteur rhésus
|
Ag anti A
|
Ag anti B
|
Ag anti AB
|
Ag anti D
|
Gs-Rh
|
|
+++
|
---
|
+++
|
+++
|
A positif
|
|
---
|
+++
|
+++
|
+++
|
B positif
|
|
+++
|
+++
|
+++
|
+++
|
AB positif
|
|
---
|
---
|
---
|
+++
|
O positif
|
|
---
|
---
|
---
|
---
|
O négatif
|
+++ = Agglutination --- = pas d'agglutination
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
Les différentes possibilités de transfusion
sanguine sont résume sur la figure ci-dessous.
Figure 4 : les différentes
possibilités de transfusion sanguine
O AB
A
B
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Emmanuel Boris 12
Bien que les individus de groupe sanguin « O »
soient les donneurs Universel, leur facteur rhésus peut faire à
ce qu'il ne donne du sang qu'à une catégorie personnes. En effet,
les individus de groupe sanguin « O » sont donneurs Universel
lorsqu'ils sont de rhésus négatif. Ainsi, un individu de groupe
sanguin « AB » rhésus négatif peuvent recevoir un sang
de tout individu. Bien que le facteur rhésus « D » soit le
facteur dominant, il existe d'autres facteurs rhésus mais les individus
qui ont ces facteurs à la surface de leurs hématies sont dits
rhésus négatifs.
D- VITESSE DE SEDIMENTATION
Elle oriente le diagnostic de certaines maladies
anémiques, infectieuses, chroniques ou
aigues.
1- Matériels
Les matériels utilisés sont les suivantes :
- Tube de Westergreen - Support à VS - Papier
hygiénique - Minuterie
2- Principe
Sous l'influence de leur densité ou de leur poids
moléculaire, les éléments figurés du sang
prélevé se déposent naturellement au fond du tube en se
dissociant ainsi du plasma.
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Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
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3- Méthode
Le sang prélevé sur un tube contenant
l'anticoagulant est pipeté avec la pipette de Westergreen jusqu'à
la graduation 0 et l'extrémité est touché avec l'index. La
paroi externe de la pipette est essuyée à l'aide du papier
hygiénique. Bien ajuster le sang jusqu'à la graduation 0. Placer
verticalement la pipette dans le support à VS. Régler la
minuterie à 60min, lire successivement le niveau de sédimentation
de la première et de la deuxième et noter les résultats en
millimètre (mm).
E- TAUX DE CD4/CD8
C'est un examen hématologique plus
précisément cytologique réalisé
généralement chez les personnes suspectés
séropositifs ou chez les personne déprimés et/ou
présentant un système immunitaire affaibli.
1- Matériels
Comme matériels nous avons :
- Une seringue stérile - Un tube à EDTA
- Une micropipette - Un incubateur
- Des embouts - Un portoir
- Un crayon gras - Un perforeur
- Des réactif CD4/CD8 - Un vortex
- L'eau distillée - Papier hygiénique
- Un Cytomètre équipé d'une imprimante,
d'un tube absorbant, d'un clavier et d'un portoir
2- Mode opératoire
- préparer la solution du malade,
- homogénéiser les réactifs après
avoir homogénéiser,
- percer les flacons contenant le réactif à l'aide
du perforeur,
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 14
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
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- homogénéiser le sang du patient
prélevé dans un tube à EDTA,
- homogénéiser et incuber pendant une heure
à l'abri des rayons solaires,
- y introduire la solution de fixation (50ul de CD4 et50ul de
CD8) et incuber pendant 5à10minutes,
- introduire à tour de rôle les réactifs CD4
puis les réactifs CD8 comme demander par la machine,
- la machine donne les résultats sur un format quelques
minutes après.
II- EXAMENS DES PARAMETRES BIOCHIMIQUES ET DOSAGE
ENZYMATIQUES
A- EXAMENS DES PARAMETRES BIOCHIMIQUES
Il s'agit d'une série de dosages nous permettant de
quantifier les éléments présents dans le plasma et dans
l'urine. Pour ce qui est de notre cas nous allons nous limiter au dosage de
certains ions et certaines molécules.
1- La calcémie
Elle représente le taux de calcium sanguin et se dose dans
un échantillon de sanguin prélevé chez un individu
à jeun et conservé dans un tube sec ou contenant de
l'héparine.
a- Matériels et réactifs
Les matériels nécessaires sont les suivants :
- Un échantillon de sang - Des tubes à essais
- Une centrifugeuse - Un portoir
- Un spectrophotomètre - Une micro pipette de 1000 ul
- Des embouts - Une solution de standard
- Deux réactifs R1et R2
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Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
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b- Mode opératoire
Le mode opératoire est le suivant :
- centrifuger les échantillons de sang pour avoir le
sérum,
- préparer la solution de travail (4000 ul de
réactif 1 +1000 ul de réactif 2),
- répartir la solution de travail dans les tubes malade,
tube blanc et tube standard,
- introduire 20 ul de solution standard dans le tube standard,
- introduire chaque échantillon de sérum dans un
tube malade,
- incuber pendant 5 minutes,
- introduire dans la machine la solution de blanc pour le
calibrage,
- faire suivre le standard et tours à tours les
échantillons à doser puis lire les valeurs affichées
à l'écran du spectrophotomètre.
2- Dosage de la créatinine
a- Principe
En milieu alcalin, la créatinine donne avec l'acide
picrique une coloration jaune-orangée. La vitesse de
développement de la coloration est proportionnelle à la
concentration en créatinine.
b- Méthodologie
La procédure se déroule comme suit (Tableau 2) :
Tableau 2 : Méthodologie de dosage de la
créatinine
|
Tubes
|
Blanc
|
Standard
|
Echantillon
|
|
Réactif 1
|
1000 ìl
|
1000 ìl
|
1000 ìl
|
|
Echantillon
|
/
|
/
|
50 ìl
|
|
Standard
|
/
|
50 ìl
|
/
|
- mélanger, incuber pendant 5 min à 37° c et
ajouter 250 ìl du réactif 2.
- mélanger, lire l'absorbance initiale (Standard), puis
l'absorbance (Echantillon).
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Emmanuel Boris 16
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
3- Dosage de l'acide urique
a- Principe
En présence d'uricase, l'acide urique est oxydé
en allantoine et peroxyde d'hydrogène. Ce dernier, sous l'action de la
peroxydase oxyde un chromogène (diclhoro-hydroxy-benzène
sulfonate et amino-antipyrine) pour former un complexe coloré.
Acide urique + 2H2O + O2 uricase > allentoine + CO2 +H2O2
TBHBA + 4-AAP + H2O2 POD > chinonimine + 2H2O HBr
4-AAP= 4amino-antipyrine, POD = peroxydase, TBHBA= acide 2,
4, 6-tribromo-3-hydroxybenzoïque.
b- Méthodologie
La procédure est la suivante (Tableau 3) :
Tableau 3 : Méthodologie de dosage de
l'acide urique
|
Tubes
|
Blanc
|
Standard
|
Echantillon
|
|
Réactif
|
1000 ìl
|
1000 ìl
|
1000 ìl
|
|
Echantillon ou standard
|
/
|
20 ìl
|
20 ìl
|
|
Eau distillée
|
20 ìl
|
/
|
/
|
- mélanger, incuber pendant 10 min à 37° c,
- mesurer l'absorbance du standard et de l'échantillon.
B- DOSAGE DE QUELQUES ENZYMES (LES TRANSAMINASES)
- Test du SGPT et SGOT
L'Alanine aminotransférase est l'enzyme (EC 2.6.1.2)
faisant partir des transaminases dont l'activité est mesurée en
biochimie clinique lors du bilant hépatique. Elle se trouve en
quantité importante surtout dans le foie. Son augmentation dans le
plasma est signe d'une cytolyse hépatique. La valeur normale de la
concentration en ALAT plasmatique est de16-35
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Emmanuel Boris 17
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
UI /l spécifique du foie. Elle se dose par le test du
SGPT tandis que l'aspartate aminotransférase est une enzyme du myocarde
et se dose par le test du SGOT.
1- Matériels et réactifs
Pour ce dosage nous avons besoin d'un échantillon de
sang, d'une micropipette, des embouts, d'un portoir, des tubes à essais
; le spectrophotomètre, des réactifs. Pour SGPT il faut un
réactif R1 et un réactif R2 ; pour le SGOT test, on a besoin d'un
réactif R1 et d'un autre R2 .Il est à noté qu'ici nous
n'avons pas de réactif standard.
2- Principe
Ces deux tests ont un principe similaire.
PGT LDH
L-ALAT+2 oxoglutarate pyruvate Lactate
3- Mode opératoire ou préparation de la
solution de dosage
Le mode opératoire se fait comme suit :
- centrifuger le sang jusqu'à obtention du
sérum,
- préparer la solution du malade (4000 ul de
réactif 1+1000 ul de réactif 2),
- introduire l'échantillon de sérum dans le tube
malade,
- incuber pendant 5 minutes, calibrer le spectrophotomètre
à l'aide du tube blanc,
- introduire l'échantillon du malade dans la machine et
lire la valeur affichée à l'écran,
III- EXAMEN BACTERIOLOGIQUE
A- PRELEVEMENT CERVICO-VAGINAL (PCV) 1- Matériels
et réactifs
Les matériels nécessaires pour ce
prélèvement sont les suivants : - Spéculum (usage
unique)
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
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Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
- Lamelles - Ecouvillon stérile
- Lame - Un microscope
Les colorants sont ceux utilisés pour la coloration de
Gram on a : le violet de gentiane, une solution de lugol, de l'alcool
950 c, la fuchine basique (poudre) ou fuchine de Ziehl diluée
au 1/10e (liquide).
2- Prélèvement
Ce prélèvement se fait uniquement au niveau du
col de l'utérus soit au cours de la consultation par le médecin
ou par l'infirmier soit par le laborantin au laboratoire. Ce
prélèvement ce fait chez les femmes n'étant par sur la
prise des antibiotiques, n'ayant par fait la leur toilette vaginale. Delors On
procède de la façon suivante :
- installer le patient sur le lit de prélèvement
après qu'elle se soit mise dans les conditions de
prélèvement,
- poser doucement le spéculum dans le vagin, presser
sur le poignet de la main gauche afin d'ouvrir le vagin et mieux observer le
col de l'utérus,
- de la main droit et à l'aide d'un écouvillon
faire un premier prélèvement au niveau du col, faire un frottis
qui sera coloré au Gram,
- avec un second écouvillon, faire un deuxième
prélèvement au niveau des culs de sac vaginaux et faire un
état frais à examiner au microscope.
3- Technique de l'examen
Cet examen a deux étapes dont une observation à
l'oeil nu de l'état du col avant les prélèvements et un
examen au microscope (état frais et coloré)
a- L'état frais
Il se fait directement après le
prélèvement des secrétions des culs de sac de la
manière suivante :
- déposer une goutte d'eau physiologique sur une lame
stérile.
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Emmanuel Boris 19
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
- triturer l'écouvillon contenant les
sécrétions des culs de sac vaginaux dans la goutte d'eau pour
avoir un mélange homogène,
- recouvrir la préparation avec une lamelle et observer au
microscope à l'objectif 40.
b- L'état coloré (coloration de
Gram)
Cette coloration se fait comme suit :
- fixer l'étalement à la chaleur et le laisser
refroidir,
- recouvrir la lame du violet de gentiane et le laisser agir
pendant 1minute,
- rincer à l'eau de robinet, recouvrir ensuite du lugol 45
secondes après, laver à l'eau, égoutter,
- bien décolorer la préparation à l'alcool
pendant 30 secondes, - bien rincer et sécher à l'air,
- une fois la préparation séchée y
égoutter une goutte d'huile à immersion et observer au microscope
à l'objectif 100.
B- PRELEVEMENT URETRAL
1- Matériels
Pour ce prélèvement nous avons besoin de :
- Anse de platine ou écouvillon - Lame
- Une compresse colorant - L'eau physiologique
Le matériel et les colorants sont les même que pour
l'examen précédant.
2- Prélèvement
Il doit se faire très tôt le matin avant que le
malade ait uriné afin de ne pas éliminer une certaine
quantité de bactéries cultivées dans l'urètre. La
procédure est la suivante :
- nettoyer le bout du pénis avec une compresse
imbibée d'eau physiologique,
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Emmanuel Boris 20
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
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de Dschang.
- presser légèrement le trajet de l'urètre
pour faire apparaitre le méat,
- prélever une goutte de sécrétion
urétrale avec une anse de platine flambée ou un écouvillon
et déposer sur la lame. La goutte est prélevée deux fois,
le premier prélèvement étalé sur une lame bien
étiquetée de sorte que l'étalement soit aussi mince que
possible pour l'examen à l'état coloré. Le second
prélèvement pour l'état frais est dilué dans une
goutte d'eau physiologique sur une autre lame et recouvert d'une lamelle et
examiné au microscope.
3- Technique de l'examen
L'examen de la préparation à l'état frais
se fait immédiatement après le prélèvement au
microscope à l'objectif 40 et on peut trouver dans l'échantillon
de PU (pour un patient malade) les Trichomonas (rare), les leucocytes et les
filaments mycéliens.
L'état coloré présente les diplocoques
Gram négatifs signe de gonococcie, des cocci en staphe signe de
staphylocoque si la préparation présente un nombre très
élevé de polynucléaires et pas autres germes
pathogènes, on déduit que le patient est atteint de chlamydia.
C- EXAMEN DE CRACHAT : RECHERCHE DES BAAR
Pour un examen du crachat, on peut réaliser le test
deux ou trois fois pour être convaincu des résultats obtenus.
1- Matériels et colorants Pour cet
examen nous besoin de :
- Un portoir de lames - Un bec bunsen - Un rack.
- Des lames - Un flambeau à alcool - microscope
- Anses de platine ou bâtonnet - papier absorbant -
Fuchine
- Acide sulfurique - Le bleu de méthylène.
2- Prélèvement
Lorsque le malade se rend au laboratoire, on recueille ses
crachat dans un premier bocal (le bocal doit être stérile,
à ouverture large et bouché) ainsi que suit : il inspire à
fond et expire
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Emmanuel Boris 21
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
en toussant très fortement pour permettre au crachat de
remonter jusqu'à la bouche. Si l'examen de ce premier échantillon
ne présente pas de BAAR, il reçoit une seconde boite aux
mêmes caractéristiques dans laquelle il recueille après le
réveil et de référence 5h. Si l'examen est encore
négatif, on peut donc conclure que ces crachats ne présente aucun
BAAR ; s'il est par contre positif, on fait un troisième examen avec un
autre échantillon pour confirmer le résultat (positif ou
négatif).Or si le premier examen est positif on réalise une
seconde confirmation afin de confirmer s'il ya présence des BAAR dans le
crachat du malade ou pas.
Il est à noter que chaque recueil de crachat se fait
strictement à jeun ; et que les crachats ne doivent pas être
confondu à la salive car les crachats contiennent habituellement des
trainés épaisse de mucus, trouées de bulles d'air, des
petits filaments de fibres, des parcelles de pus et occasionnellement des
trainées brunâtres de sang.
3- Méthodologie
Cet examen de crachat est très délicat pour
cela, il faut respecter le processus à la lettre afin de ne pas
contaminer (souiller) les échantillons et surtout ne pas se contaminer.
Ainsi, il faut :
- toujours utiliser de nouvelles lames propres et non
gréseuses qu'on identifie correctement avec un crayon,
- allumer la lampe à alcool ; à l'aide d'une
anse de platine ou de l'extrémité d'une baguette, prélever
(derrière la flamme) la partie jaunâtre contenant le crachat et le
placer sur la lame,
- étaler le dépôt de façon
uniforme, laisser le frotti séché à l'air puis fixer en
faisant passer les lames trois fois à travers la flamme,
- après trois minutes, flamber délicatement les
lames, laver à l'eau et égoutter.
- recouvrir ces lames avec une solution de décoloration
(acide sulfurique) pendant trois minutes, laver abondamment à l'eau et
égoutter. On peut reprendre l'étape précédente de
décoloration, si les lames ne sont pas proprement
décolorées.
- couvrir ensuite la préparation du Bleu de
méthylène pendant une minute, égoutte la solution, laver
la préparation à l'eau et essuyer le dessus des lames à
l'aide du papier absorbant.
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 22
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
- sécher les lames en les disposant dans un rack.
- imbiber le frotti de l'huile à immersion puis,
examiner le frotti au microscope à l'objectif 100x. Les BAAR sont sous
forme de bâtonnets rouges sur un fond bleu.
D- CULOT URINAIRE OU ECBU
1- Matériels.
Les matériels nécessaires pour cette manipulation
sont les suivants :
- Echantillon d'urine pris dans un tube sec stérile -
Deux lames
- Centrifugeuse (manuelle ou oblique) - Une lamelle
- Huile à immersion, un tube à essais - Eau
physiologique
2- Prélèvement.
Après avoir fait une toilette externe, recueillir 50 ml
l'urine du milieu dans un récipient propre. Tout en sachant qu'une urine
conservée longtemps à température ambiante peut favoriser
la prolifération microbienne.
3. Technique de l'examen
Lorsqu'il s'agit d'analyser la coloration et la consistance de
l'urine, cet examen est dit macroscopique ; il est microscopique lorsque
l'analyse se fait au microscope sur des préparations fraiches et
colorées.
L'urine contient en suspension des éléments
microscopiques (cellules, cristaux ...) qui peuvent être mis en
évidence suivant la procédure ci-après :
- agiter le flacon d'urine et remplir le 3/4 du tube à
essais, - centrifuger pendant 5 min à la vitesse 5000 trs/ min, -
rejeter le surnageant en retournant d'un geste le tube,
- secouer le tube pour mélanger à nouveau le culot
puis, déposer une goute de ce culot sur une lame et recouvrir avec une
lamelle pour l'analyse à l'état fraiche,
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 23
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
- réaliser ensuite un frotti sur une seconde lame pour
l'analyse à l'état coloré, - examiner au microscope aux
objectifs 40x (état frais) et 100x (état coloré).
IV- LA SEROLOGIE
? Obtention du sérum
Les examens sérologiques sont les examens
effectués sur le sérum. Après réaction, il y a
formation des complexes Ag-AC sous forme d'agglutination, de
précipitation ou formation du complément. L'obtention du
sérum se fait après centrifugation du sang recueilli dans un tube
sec.
? Principe de la centrifugation
Les constituants du mélange sont soumis à la
gravité, à la poussée d'Archimède et à
l'agitation moléculaire. Lorsque la centrifugeuse est mise en marche, la
force centrifuge imprime une vitesse de sédimentation à chaque
constituant du mélange. Les constituants du mélange
sédimentent en fonction de leur densité et leur poids
moléculaire. L'intérêt de la centrifugation dans un
laboratoire est de permettre la séparation des échantillons
biologiques afin d'obtenir le culot ou le surnageant pour l'analyse.
A- TESTS DE SEROLOGIE HIV
1- Dépistage rapide du VIH
Le SIDA est une maladie causée par le VIH et se
caractérise par une diminution de la population de lymphocytes T. Chez
les personnes infectées, le virus détruit les cellules T-Helpers,
exposant ainsi le patient aux infections opportunistes et aux cancers. Le VIH-1
et le VIH-2 sont responsables de la maladie et leur présence dans le
sang induit la production des anticorps spécifiques dirigés
contre eux. Le dépistage rapide se fait sur la bandelette Abbott
détermine VIH-1 /2 dont la description sera fait.
2- Principe de la méthodologie
Le kit Abbott Détermine VIH-1/2 est un test
Immuno-chromatographique pour la détection qualitative des anticorps
antiVIH1 et antiVIH2. L'échantillon déposé sur la zone de
dépôt migre vers la zone de dépôt du conjugué,
il se reconstitue et se mélange avec le conjugué colloïde de
sellenium-d'antigène. Ce mélange continue à migrer sur la
phase solide
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
jusqu'aux antigènes recombinants immobilisés et
aux peptides synthétiques au niveau de la zone du patient.
B- TEST DE CHLAMYDIA IG
Le chlamydia est une infection bactérienne
causée par une multitude de bactérie donc le plus connu est
Chlamydiae trachomatis. La maladie se manifeste par une miction
douloureuse, des douleurs de bas ventre chez la femme et un écoulement
génital inhabituel. Le dépistage est basé sur les
réactions Ag-AC dont nous allons décrire celle qui se passe dans
la trousse Immunocomb.
1- Principe
Lorsque les anticorps anti Chlamydiae
trachomatis contenus dans le sérum sont introduits dans la
phase mobile (bac de développement), ils migrent vers les spots
correspondants de la phase stationnaire (dents de peignes) à la surface
desquels sont sensibilisés les antigènes de la chlamydiae
trachomatis et forment des complexes Ag-AC qui sont visibles
après révélation.
2- Mode opératoire
Le test débute par la distribution de 10 ul de
sérum dans le puits A du bac de développement (phase mobile). La
dent du peigne (phase stationnaire) est ensuite introduite dans ce puits, puis
transférée successivement dans les autres puits allants
jusqu'à F en respectant la durée indiquée sur la notice
dont voici le résumé (tableau 4) :
Tableau 4: Mode opératoire du test de
chlamydia
ETAPE COMPARTIMENT OPERATION
Réaction Ag-AC A Homogénéiser, incuber 10
min, absorbé
Lavage B Agiter, incuber 2 min, absorbé
Conjugué C Homogénéiser, incuber 20 min,
absorbé
Lavage D Agiter, incuber 2 min, absorbé
Lavage E Agiter, incuber 2 min, absorbé
Révélation F Homogénéiser, incuber 10
min, absorbé
Réaction d'arrêt G Incuber 1 min, sécher
à l'air
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 24
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
TROISIEME PARTIE :
METHODES DE DIAGNOSTIC
DES MALADIES
PARASITAIRES
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Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
I- LE PALUDISME
Cette maladie est transmise par un parasite appelé
Plasmodium dont l'agent vecteur est l'anophèle femelle. Ce parasite
existe sur plusieurs formes mais la forme la plus infestante est Falciparum.
Au laboratoire de l'hôpital de district de Dschang, deux
méthodes sont employées pour le diagnostic de cette maladie.
A- LA GOUTTE EPAISSE
1- Matériel et réactifs
Pour réaliser la goutte épaisse nous avons besoin
de :
- Vaccinostyle - Lames
- Coton - Alcool.
- Giemsa rapide solution colorant dilué au
1/10ème 1ml de Giemsa + 9ml d'eau distillée suffisante
pour 4 lames ou bien 3 gouttes de Giemsa + 2 ml d'eau distillée, cette
quantité suffit pour une lame.
2- Prélèvement
Le sang est prélevé suivant la procédure
ci-après :
- choisir le 3ème ou le 4ème
doigt du malade,
- nettoyer le bout du doigt choisi avec un coton imbibé
d'alcool,
- laisser sécher ou assécher avec un coton sec,
- faire une ponction sur la face latérale, du doigt avec
un vaccinostyle stérile à usage unique,
- essuyer la première goutte de sang avec le coton sec,
- presser le doigt pour recueillir une autre goutte de sang qui
sera étalée sur une lame en
faisant des cercles concentriques,
- laisser sécher à l'air.
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
3- Technique de coloration de la goutte
épaisse
La coloration se fait de la manière suivante :
- placer les lames à colorer contenant la goutte de sang
étalée sur deux baguettes,
- couvrir l'étalement avec du Giemsa dilué au
1/10ème,
- laisser agir 10 minutes avec le Giemsa rapide ; 20 minutes
avec le Giemsa lent,
- égoutter les lames à l'eau du robinet, laisser
sécher, -examiner au microscope à l'objectif à immersion
(100 X).
4- Résultats de l'examen
Une recherche positive montre les trophozoites (plasmodium)
dont le noyau est coloré en rouge et le cytoplasme en bleu. Ce
résultat s'exprime en nombre de trophozoites par leucocytes dans un
champ visuel. L'absence du plasmodium témoigne l'absence du paludisme.
Au microscope on peut observer la figure ci-dessous.
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 27
Figure 5 : Plasmodium falciparum (goutte
épaisse)
B- FROTTIS SANGUIN
1- Matériels et réactifs
La réalisation du frottis sanguin nécessite les
matériels et réactifs suivants :
- Tube avec anticoagulant - Lames - Coton - Alcool
- L'eau distillée - Lamelle
- Solution de Giemsa diluée au 1/10e
2- Mode opératoire
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
Il se fait avec le sang total prélevé dans un tube
avec l'EDTA comme anticoagulant. - déposer une goutte de sang à
une extrémité de la lame porte objet,
- tenir une lamelle au dessus de la goutte de telle sorte qu'elle
forme un angle d'environ 60° avec la lame d'étalement,
- laisser diffuser le sang par capillarité sur les bords
de la lame, tirer vers l'autre extrémité d'un coup en
décollant progressivement de la lame,
- sécher en agitant, recouvrir la lame avec une solution
de May-Grünwald et attendre 3 minutes, mettre autant de goutte d'eau
distillée et attendre 3 minutes,
- égoutter la lame et la recouvrir avec une solution de
Giemsa diluée au 1/10e et laisser agir pendant 15 minutes,
verser le colorant et sécher,
- observer à immersion au microscope avec l'objectif 100
(figure 6).
Les résultats ici se donnent en termes de «
présence de parasites » et de « absence de parasites
».
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 28
Figure 6 : Plasmodium falciparum (frottis
sanguin)
II- DYSENTERIE AMIBIENNE
Cette maladie est causée par un parasite protozoaire
appelé Entamoeba histolytica ayant pour réservoir les eaux
souillées.
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
A- EXAMEN MACROSCOPIQUE DES SELLES
Il consiste à donner la consistance (selle
pâteuse, diarrhéique...), la couleur, les éléments
non fécaux surajoutés (mucus, sang...).
B- EXAMEN MICROSCOPIQUE DES SELLES
1- Matériel et réactifs
Les matériels et réactifs nécessaires sont
les suivants :
- Pot pour recueillir les selles - Lames et lamelles
- Applicateur. - Sérum physiologique
- Huile à immersion.
2- Technique d'examen
La procédure d'examen suit le cheminement suivant : -
déposer une goutte d'eau physiologique sur une lame,
- y étaler les selles de façon homogène,
- recouvrir l'échantillon avec une lamelle,
- observer au microscope à l'objectif 10, puis 40X.
L'observation au microscope nécessite au
préalable une mise au point qui se fait en deux temps : la
première mise au point est approximative et la seconde est exacte.
3- Résultat
Apres observation au microscope la présence des kystes
d'Entamoeba histolytica (figure 7) témoigne que le patient
souffre de la dysenterie amibienne.
|
|
Kystes
d'Entamoeba histolytica
|
|
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 29
Figure 7 : kystes d'Entamoeba histolytica
vu au microscope
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Emmanuel Boris 30
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
III- STATISTIQUE ET INTERPRETATION DES RESULTATS
? PALUDISME
Apres diagnostic de cette maladie les résultats ont
été élaborés sur deux mois (figure 8 et figure 9)
afin de fait une comparaison entre ceux-ci.
Résultats du mois de juillet
|
70 60 50 40 30 20 10
0
|
|
|
|
Hommes Femmes
|
0-11 mois 1- 4 ans 5-14 ans 15-49 ans 50-64 ans 65 et plus
Figure 8 : Résultats du diagnostic du
paludisme du mois de juillet Résultats du mois d'aout
|
60 50 40 30 20 10
0
|
|
|
|
|
0-11 mois 1- 4 ans 5-14 ans 15-49 ans 50-64 ans 65 et plus
|
|
Hommes Femmes
|
|
|
Figure 9 : Résultats du diagnostic du
paludisme du mois d'aout
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Emmanuel Boris 31
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
Les résultats du diagnostic du paludisme montrent que
la tranche d'âge la plus infectée est celle qui est située
entre 15 à 49ans. C'est la tranche d'âge la plus active. Dans
cette tranche les femmes sont les plus infectées comparées aux
hommes. Des lors le taux d'infection est plus élevé chez les
hommes au mois d'aout (72) par rapport au mois de juillet (51). Chez les femmes
le taux est plus élevé au mois de juillet(137) par rapport au
mois d'aout(101). Ceci peut s'expliquer par le fait que le respect des
règles d'hygiène a été plus accentué au
cours de cette période.
? DYSENTERIE AMIBIENNE
Apres diagnostic de cette maladie les résultats ont
été élaborés sur deux mois (figure 10 et figure 11)
afin de fait une comparaison entre ceux-ci.
Résultats du mois de juillet
|
4.5
4
3.5
3
2.5
2
1.5
1
0.5
0
|
|
|
|
|
0-11 mois 1- 4 ans 5-14 ans 15-49 ans 50-64 ans 65 et plus
|
|
Hommes Femmes
|
|
|
Figure 10 : Résultats du diagnostic du
paludisme du mois de juillet
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 32
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
Résultats du mois d'aout
|
6 5 4 3 2 1 0
|
|
|
|
Hommes Femmes
|
0-11 mois 1- 4 ans 5-14 ans 15-49 ans 50-64 ans 65 et plus
Figure 11 : Résultats du diagnostic du
paludisme du mois d'aout
Les résultats du diagnostic de la dysenterie amibienne
montrent un taux élevé chez les hommes au mois de juillet (6) par
rapport au mois d'aout (1).Chez les femmes le taux est plus élevé
au mois de juillet (9) par rapport au mois d'aout(7). En comparant le taux
d'infection (sexe confondu) du mois de juillet par rapport au mois d'aout on
constate qu'il a chuté au mois d'aout. Certaines tranches d'âge au
mois d'aout ne sont pas infectées. Ceci peut être du à un
respect des règles d'hygiène découlant peut être
d'une prise de conscience. La tranche d'âge la plus infectée est
celle de 15 à 49 ans. Ceci s'explique par le fait que c'est la tranche
d'âge la plus active.
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
QUATRIEME PARTIE :
DISCUSSION, CONCLUSION,
PROBLEME POUVANT FAIRE L'OBJET
D'UNE RECHERCHE
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 33
RECOMMANDATION, PERPECTIVES ET
Rapport de stage rédigé par GOMSEU DJOUMSIE
Emmanuel Boris 34
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires
dans le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
? DISCUSSION
En ce qui concerne la pratique des tests , il peut arriver
qu'on donne des résultats douteux(VN) aux patients soit à cause
du temps qui sépare le prélèvement d'un
échantillon( d'urine, de PCV ou de sang par exemple) et l'analyse de cet
échantillon ( puisque les examens doivent être fait directement
après le prélèvement ); de la qualité moins bonne
des colorants et la lecture approximative des résultats. Il est donc
important que le matériel de travail soit de bonne qualité et que
le technicien de laboratoire soit de plus en plus attentif et vigilent lors du
travail afin de produire des résultats fiables.
D'après les statistiques nous remarquons que les femmes
se font le plus examiner que les hommes. Nous pensons que la raison ne vient
pas du faite qu'elles soient plus sensibles aux maladies que les hommes ont
peur de savoir leurs statuts.
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Emmanuel Boris 35
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
CONCLUSION
Parvenu aux termes de notre stage durant le lequel il
était question pour nous de mettre en pratique les connaissances
théoriques reçus lors des enseignements magistraux à
l'Université, notre structure d'accueil qui était l'hôpital
de district de Dschang a pu à son niveau nous donner cette
opportunité. C'est ainsi que nous avons été capables de
réaliser avec succès des prélèvements (de selles,
sanguins, urétraux, cervico-vaginal...) ; des analyses macroscopiques et
microscopiques des échantillons prélevés ; de maitriser
les différentes techniques de coloration (Gram, Giemsa ...) ainsi que
l'identification au microscope certains agents pathogènes tels que les
BAAR, les trophozoides, les levures. Les différentes méthodes de
diagnostic de certaines maladies parasitaires à l'instar du paludisme et
de la dysenterie amibienne qui a été le principal objectif de
notre stage ont été également apprises. En effet,
grâce au dynamisme de son personnel et surtout celui du laboratoire, nous
pouvons dire que nos lacunes pratiques ont presque été
comblées
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Emmanuel Boris 36
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
? RECOMMANDATION ET PERPECTIVES
L'hôpital de District de Dschang est une grande
structure de santé mais certaines méthodes ou test sont absents
pour perfectionner les résultats.
Contrôler la date de péremption des
différents réactifs du laboratoire. Suivre normalement les
différentes étapes d'une méthode de diagnostic
Dans le cadre du diagnostic du paludisme il faut des tests
rapides comme le Test de diagnostic rapide immunochromatographique
pour obtenir des résultats plus fiables.
Une mise sur pied d'une technique de biologie
moléculaire qui est la PCR surtout pour les bactéries non
cultivables, ayant des exigences nutritionnelles difficiles, sera très
important pour améliorer les résultats.
? PROBLEME POUVANT FAIRE L'OBJET D'UNE
RECHERCHE
? Explication sur le taux d'infection plus élevé
chez les femmes que chez les hommes en ce qui concerne certaines maladies
parasitaires.
? La différence entre les différents
sérotypes (espèces) du plasmodium après coloration et
observation au microscope
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Emmanuel Boris 37
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
? REFERENCES
V' Guide d'examen de laboratoire au niveau d'un centre
de santé de Denis MOULO Cécile MACE
V' Analyse médicale Dr Marie
Françoise Odou
V' Pages F, Orlandi-Pradines E, Corbel V. Vecteurs du
paludisme : biologie, diversité, contrôle et protection
individuelle. Méd Mal Infect 2007 ; 37 : 153-61.
V' Diagnostic biologique du paludisme
par Marie-Ange Rason, MD7èmeédition du cours
international «Atelier Paludisme»25 Mars 2009 -Institut Pasteur de
Madagascar
Venant de DOUALA
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
ANNEXE 1
Hôpital de district de Dschang
Venant de BAFOUSSAM
Rond-point
De la préfecture
Venant de l'IRAD
roun
Venant de l'Université
Figure 12 : Plan de localisation de
l'hôpital de district de Dschang
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Emmanuel Boris 38
Méthodes de diagnostic des maladies parasitaires dans
le laboratoire de l'hôpital de district
de Dschang.
ANNEXE 2
Westergreen Spectrophotomètre poupinel
Centrifugeuse
Automate d'hématologie Cytomètre
Microscope Bain marie
Incubateur Balance électronique Boites de
pétri Lames colorées
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Emmanuel Boris 39
Bec bunsen
Figure 13 : Quelques appareils du laboratoire
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